流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化分析

发布时间：2017-08-15 19:10

  本文关键词：流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化分析

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【摘要】：目的优化甲、乙型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件,提高流感病毒的分离效果。方法将5种流感病毒液(甲型流感病毒:甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2和乙型流感病毒:Victoria、Yamagata)分别接种于MDCK细胞,通过比较不同的病毒接种量(30μl/cm2、60μl/cm2、90μl/cm2、120μl/cm2、150μl/cm2)、不同的病毒孵育时间(0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h)、不同的TPCK-胰酶添加浓度(1.0μg/ml、2.0μg/ml、3.0μg/ml、4.0μg/ml、5/0μg/ml)以及不同的MDCK细胞增毒代次(连续盲传5代)对5种流感病毒易感性的影响,确定其最佳分离效果;对分离后的病毒以红细胞凝集(HA)方法检测病毒滴度,结果通过对比病毒HA滴度结果,5种流感病毒(甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2、Victoria和Yamagata)的最佳病毒接种量分别为:90μl/cm2、90μl/cm2、60μl/cm2、120μl/cm2、120μl/cm2;最佳病毒孵育时间:甲型流感病毒为1.0~1.5 h,乙型流感病毒为2.0~2.5 h;胰酶最佳使用浓度分别是:2.0μg/ml、2.0μg/ml、2.0μg/ml、3.0μg/ml、3.0μg/ml;最适宜的细胞增毒传代次数为:1代、3代、2代、2代、2代;甲型流感病毒经培养后病毒的HA滴度低于乙型流感,甲型H1N1流感病毒经培养后HA滴度较低。结论甲型流感病毒对MDCK细胞的易感性低于乙型流感病毒;甲型H1N1流感病毒的分离效果低于季节性H1N1和季节性H3N2;Victoria与Yamagata的分离条件基本相同。
【作者单位】： 锦州市疾病预防控制中心;渤海大学;辽宁医学院附属第一医院;辽宁省疾病预防控制中心;
【关键词】： 流感病毒 MDCK细胞 分离培养
【基金】：国家重大传染病防治科技重大专项项目(2012ZX10004209-001) 食源性致病微生物的生物信息学研究(LT2014024)
【分类号】：R373.13
【正文快照】： 流感病毒可分为甲、乙和丙3种型别,其中甲型流感病毒因其抗原性易发生变异,传染性强,容易造成人和禽畜的死亡[1-3];乙型流感病毒与甲型病毒有许多相似特征,乙型流感病毒主要感染人,常常引起局部暴发。目前,采用MDCK细胞来分离流感病毒,所分离的毒株抗原性和基因特性比较稳定更

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘波;陈玲;张泓;;甲型流感病毒编码蛋白的突变及其致病机制[J];病毒学报;2013年04期

2 王玉国;洪小栩;何丽芳;杨宁;王丽丽;赵琼英;蒋澄宇;;2009甲型H1N1疫苗株与普通季节性H1N1疫苗株在呼吸道细胞中感染效率的比较[J];基础医学与临床;2012年06期

3 张欣;倪汉忠;邹丽容;钟豪杰;周杰;朱晓兰;杨芬;管大伟;肖红;柯昌文;武婕;林锦炎;;广东省低血凝滴度甲型H1N1流感病毒HA基因变异特征[J];中国病毒病杂志;2012年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 刘艳芳;郭卫东;王文瑞;雷霞;;内蒙古2012年流感流行病学及病原学特征分析[J];中国公共卫生管理;2014年04期

2 庄妍;雷明玉;曾正;唐光鹏;;2009年贵州省流行性感冒监测结果分析[J];贵州医药;2014年02期

3 王莎;唱韶红;刘波;巩新;徐威;吴军;;H7N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析[J];军事医学;2015年06期

4 李叶兰;鲁梦露;刘如春;陈田木;;2010年长沙市甲型H1N1流感大流行血清学流行病学调查[J];实用预防医学;2014年12期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 张璐;基于DNA疫苗技术的病毒保护性抗体研究[D];南京医科大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 佟瑶;多酸洗手液制备及抗甲型流感病毒效果评价[D];吉林大学;2014年

2 贺晴;季节性流行性感冒疫苗对6-59月龄儿童保护效果研究[D];南方医科大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 黄勇;杨华可;袁达康;黎景全;李艳芬;周建孟;李宇政;陈永迪;;2010-2011年广东省东莞市甲型H1N1流行性感冒病毒血凝素基因变异特征研究[J];疾病监测;2012年03期

2 王玉国;洪小栩;何丽芳;杨宁;王丽丽;赵琼英;蒋澄宇;;2009甲型H1N1疫苗株与普通季节性H1N1疫苗株在呼吸道细胞中感染效率的比较[J];基础医学与临床;2012年06期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;几乎所有流感病毒都源于鸟类——访旅美中国学者哈亚[J];浙江林业;2004年02期

2 杨涛,杜绍范,刘明;A型流感病毒NS1蛋白研究进展[J];现代畜牧兽医;2005年03期

3 魏宏,林锋强,庄向生,张步伍;A型流感病毒NS1蛋白的结构与功能[J];动物医学进展;2005年09期

4 林u&;周伦江;庄向生;;应用反向遗传技术研究流感病毒[J];福建畜牧兽医;2007年06期

5 贺英;曹旺斌;;A型流感病毒的分子生物学研究进展[J];中国家禽;2008年01期

6 赵朴;郑玉姝;贾贝贝;刘兴友;李海燕;;A型流感病毒PB1-F2研究进展[J];中国人兽共患病学报;2008年07期

7 赵朴;郑玉姝;乔传玲;贾贝贝;刘兴友;;A型流感病毒逃避免疫应答的策略[J];生物化学与生物物理进展;2008年10期

8 葛叶;邓国华;;A型流感病毒聚合酶研究进展[J];中国预防兽医学报;2009年02期

9 陈继明;孙映雪;刘朔;蒋文明;陈杰;侯广宇;李金平;;2009年新甲型H1N1流感病毒的来源和去向分析[J];科学通报;2009年12期

10 杨琴;张兴晓;杨灵芝;;3种细胞培养流感病毒的比较[J];动物医学进展;2009年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 杜雄伟;李叶;杨卓;;A型流感病毒对小鼠致病机制的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）[C];2009年

2 杨琴;张兴晓;杨灵芝;郭庆栋;;流感病毒在三种细胞中的生长对比[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年

3 袁达康;黄勇;杨华可;黎景全;李艳芬;;东莞市2004-2008年流感病毒监测结果及分析[A];新发传染病防治学习研讨会论文集[C];2008年

4 高玉伟;夏咸柱;扈荣良;王立刚;刘丹;邹啸环;黄耕;贺文琦;;虎流感病毒的分离、鉴定、基因分析与抗体调查(摘要)[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集（下）[C];2003年

5 李叶;廖明;辛朝安;;A型流感病毒对小鼠致病机制的研究进展[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年

6 曲敬来;常晓;;流感病毒A上呼吸道感染快速诊治的研究[A];2005年全国危重病急救医学学术会议学术论文集[C];2005年

7 许飞;张伟;;流感病毒重症肺炎的临床特征:江西3例报道[A];江西省中西医结合学会呼吸病专业委员会首次学术会议论文集[C];2009年

8 冉伟;孙艺学;朱利塞;丁壮;丛彦龙;;流感病毒种内与种间传播的影响因素[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集[C];2013年

9 高福;;流感病毒跨种传播的结构学基础[A];中国生物化学与分子生物学会第十一次会员代表大会暨2014年全国学术会议论文集——专题报告一[C];2014年

10 孙丹丹;包永占;史万玉;钟秀会;;中药抗流感病毒作用机制研究进展[A];纪念中国畜牧兽医学会中兽医学分会成立30周年中国畜牧兽医学会中兽医学分会2009年学术年会、华东区第十九次中兽医科研协作与学术研讨会论文集[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 主任医师 冀衡;流感病毒[N];农村医药报（汉）;2003年

2 杨孝文　编译;揭开20世纪初西班牙大流感致命秘密[N];北京科技报;2007年

3 本报驻美国记者 毛黎;“狼”依然在家门口徘徊[N];科技日报;2008年

4 ;锁住流感病毒,全能疫苗包打天下[N];新华每日电讯;2009年

5 叶圣琳;生活小细节与健康大作用[N];大众科技报;2009年

6 本报记者 常青　王均珠;可快速检测甲型H1N1流感病毒[N];贵阳日报;2009年

7 本报驻英国记者 何屹;从病毒学揭秘甲型H1N1流感病毒[N];科技日报;2009年

8 记者 刘国远　杨伶;世卫调查：初步揭秘甲型流感病毒[N];新华每日电讯;2009年

9 郝成涛;甲型H1N1流感病毒检测试剂形成配套体系[N];科技日报;2009年

10 本报记者 刘霞;抱着“枪”睡大觉[N];科技日报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 房家立;A型流感病毒感染诱导COX2基因表达机制研究[D];武汉大学;2011年

2 徐一鸣;流感病毒多亚型检测方法的研制和应用[D];吉林大学;2009年

3 朱紫祥;p53在I型干扰素介导的先天性抗甲型流感病毒中的作用研究[D];中国农业科学院;2013年

4 张守平;p-STAT1蛋白参与调节A型流感病毒的复制及炎性反应的研究[D];中国农业大学;2015年

5 靳远;甲型流感病毒重要亚型的进化研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年

6 李雪辉;肺炎支原体及流感病毒快速检测方法的评估应用及探索研究[D];第三军医大学;2011年

7 李青;流感病毒神经氨酸酶的结构、耐药及新型抑制剂作用的机制研究[D];中国科学技术大学;2012年

8 魏东;p38MAPK在H9N2-SIV诱导小鼠急性肺损伤中的作用[D];甘肃农业大学;2013年

9 崔巍;基于生物信息学方法研究流感病毒及疗法[D];南开大学;2014年

10 贾雷立;禽流感病毒分离、复合多表位重组体构建及实验免疫研究[D];吉林大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 吕锡宏;上海地区流感流行与甲型流感病毒变异情况的研究[D];复旦大学;2010年

2 高蕾;中国部分地区猪血清对甲型H1N1流感病毒的交叉免疫研究分析[D];山东农业大学;2011年

3 李颖;天津市流感病毒分子流行病学的初步研究[D];天津医科大学;2003年

4 朱云;新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型的建立及初步研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年

5 邢晓会;2008-2012年我国B型流感病毒耐药毒株的流行状况及生物学特性研究[D];中国疾病预防控制中心;2013年

6 秦萌;流感病毒检测新技术的建立及初步应用研究[D];中国疾病预防控制中心;2010年

7 刘洪强;流感病毒染布氏田鼠动物模型的建立[D];福建农林大学;2011年

8 徐秋林;流感病毒寡核苷酸检测芯片的初步研究[D];第一军医大学;2005年

9 赵刚;甲型H1亚型流感病毒检测方法的建立及应用[D];华中农业大学;2011年

10 韦天彬;汕头市区2004年急性上呼吸道感染患儿流感病毒的监测[D];汕头大学;2006年

，

本文编号：679815