miR-144通过靶向Atg4a调控卡介苗和雷帕霉素诱导的RAW264.7细胞自噬

发布时间：2017-08-16 10:32

  本文关键词：miR-144通过靶向Atg4a调控卡介苗和雷帕霉素诱导的RAW264.7细胞自噬

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【摘要】：目的研究卡介苗(BCG)对RAW264.7细胞中与细胞自噬相关的miRNA(miR-21、miR-181a、miR-155和miR-144)表达的影响,并以miR-144为研究对象,验证miR-144对自噬相关基因Atg4a的靶向调控关系,探究其在结核分枝杆菌感染宿主细胞过程中调控细胞自噬途径的作用机制。方法分别对RAW264.7巨噬细胞进行饥饿处理12 h、50 ng/m L雷帕霉素作用2 h、10 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用12 h;BCG刺激RAW264.7巨噬细胞12 h、24 h、48 h后,收集细胞,提取总RNA;利用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-21、miR-181a、miR-155及miR-144的表达水平;构建p MIR-Report-Atg4a及p MIR-ReportAtg4a mut重组质粒,利用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR及Western blot法验证miR-144与Atg4a的靶向作用关系。结果 BCG刺激RAW264.7巨噬细胞后,可使miR-21、miR-155及miR-144表达上调,miR-181a表达下调;经雷帕霉素诱导的细胞自噬,4种miRNA表达量与正常组相比分别上调约64倍、52倍、14倍、1倍;与正常组相比,3-MA处理细胞组,miR-21、miR-144、miR-155、miR-181a的表达量分别下调1.22倍、1.05倍、1.54倍及12.5倍;双萤光素酶报告系统及Western blot法证实,miR-144可靶向作用于Atg4a-3'UTR并抑制其表达。结论 miR-144可靶向抑制自噬相关基因Atg4a的表达,参与调控RAW264.7巨噬细胞的自噬过程。
【作者单位】： 宁夏医科大学检验学院;
【关键词】： miR- 结核分枝杆菌 细胞自噬 靶向调控
【基金】：国家自然科学基金(31160494) 教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET 11-11023)
【分类号】：R392
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度约19~24个核苷酸的内源性非编码RNA分子,主要通过形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-inducedsilencing complex,RISC)与靶mRNA 3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)互补结合,诱导或抑制靶mRNA的翻译[1],并实现基因在转录水平后的调控。已

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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【共引文献】

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3 徐t，

本文编号：682800