聚乙烯亚胺介导三质粒共转染HEK293细胞的条件优化

发布时间：2017-08-17 12:29

  本文关键词：聚乙烯亚胺介导三质粒共转染HEK293细胞的条件优化

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【摘要】：本研究用聚乙烯亚胺(PEI)介导表达绿色荧光蛋白(GFP)的rAAV包装系统(pAAV-CMV-GFP、pAAVRC和pHelper)转染人胚肾293细胞(HEK293细胞)。用ImagePro Plus6.0图像分析软件计算表达GFP的细胞比例来测定1、2、3、4、5、6μg/孔不同质粒剂量,1∶1、3∶1、5∶1、7∶1不同PEI/质粒比值及转染12、24、36、48、60、72h不同时间三个变量对转染效率的影响,以优化PEI介导三质粒共转染HEK293细胞的条件。结果显示,质粒剂量为4μg/孔、PEI/质粒比值为3∶1~5∶1时转染效率维持较高水平;转染效率-转染时间曲线为S型增长曲线,转染效率于60h达到平台期。优化PEI转染条件能增加三质粒共转染HEK293细胞的转染效率。
【作者单位】： 湖南师范大学第一附属医院;湖南省人民医院心血管内科;中南大学湘雅公共卫生学院流行病学与卫生统计学系;中国科学院深圳先进技术研究院生物医药与技术研究所;
【关键词】： 聚乙烯亚胺 腺相关病毒 HEK细胞 转染效率 条件优化
【基金】：长沙市民生科技支撑专项基金资助项目(K1106022-31)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 引言近年来,腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)作为基因治疗的载体,由于具有良好的安全性及较弱的免疫原性等优点,在动物实验、临床试验中应用渐多[1-3]。目前制备重组AAV(recombinantAAV,rAAV)主要采用一种三质粒共转染人胚肾293(HEK293)细胞的包装系统[4]。如何让三质

【共引文献】

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本文编号：689058