虫卵ITS-2基因序列鉴别华支睾吸虫与扇棘单睾吸虫研究及应用

发布时间：2017-08-19 01:24

  本文关键词：虫卵ITS-2基因序列鉴别华支睾吸虫与扇棘单睾吸虫研究及应用

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【摘要】：目的建立以分子生物学技术为基础的华支睾吸虫与扇棘单睾吸虫的鉴别诊断方法，评估华支睾吸虫流行区内扇棘单睾吸虫感染的比重。 方法在华支睾吸虫流行区采集华支睾吸虫和扇棘单睾吸虫成虫，从成虫虫体中直接分离两种虫卵，收集、保存作为实验样本，提取两种吸虫虫卵的基因组DNA，PCR扩增ITS-2序列，将PCR扩增产物电泳并根据条带大小判断虫种，将PCR扩增产物纯化、测序，将测序得到的核酸序列经DNAStar软件整理分析并与NCBI GenBank已登录的序列比对做同源性分析，以确保结果正确；再将两种吸虫卵按虫卵数目不同分组实验以及与蛔虫、鞭虫、钩虫、蛲虫四种常见肠道线虫做交叉实验，检测本实验方法效度；最后以扶绥县现场粪检诊断为华支睾吸虫感染者的粪便为实验材料，将水洗沉淀后获得的虫卵及粪渣的混合物重复前述实验步骤，根据对PCR产物电泳后的条带有无及条带位置，推断粪检结果为“华支睾吸虫感染者”感染的吸虫虫种，，分析评估华支睾吸虫流行区内扇棘单睾吸虫感染者的比重。 结果分别对以华支睾吸虫卵及扇棘单睾吸虫卵基因组DNA为模板的PCR扩增产物电泳后，观察电泳图谱可以见到在400bp、500bp左右处各显示一条明显条带，在以两种虫卵DNA混合液为模板的PCR扩增产物的电泳图谱中，可见在400bp和500bp左右处各有一条明显条带，将测序得到的核酸序列进行Blast比对后，显示与NCBI GenBank中的相应序列高度同源；按虫卵数不同进行的分组实验中，电泳结果显示，实验组中不同虫卵数的华支睾吸虫样本均可在400bp左右处见到一条明显条带，扇棘单睾吸虫样本大部分可在500bp处见到明显条带；混入四种肠道线虫卵的试验样本，单独以任一种线虫卵DNA为模板进行的PCR扩增，扩增产物电泳后的电泳图谱均不见任何明显条带，而以混入了两种吸虫卵DNA为模板进行的PCR扩增，将扩增产物进行电泳后的电泳图谱则在相应位置出现明显条带；以加藤法检测吸虫虫卵阳性的粪便样本为实验材料进行虫种鉴定中，虫卵阳性样本的检出率为95.93%，其中华支睾吸虫感染者82人，占49.70%，扇棘单睾吸虫感染者76人，占46.06%，混合感染者7人，占4.24%。没检出的占4.07%。 结论1.本方法可对粪便中华支睾吸虫卵和扇棘单睾吸虫卵进行有效鉴别，检验效度较高，可以作为两虫种的鉴别检测方法。2.扶绥县现场调查诊断为华支睾吸虫感染者近一半为误诊，该县人群华支睾吸虫感染率调查评估存在较大偏差。
【关键词】：华支睾吸虫 扇棘单睾吸虫 ITS-2
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R383.2;R3416
【目录】：

• 中英文缩略语表4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-13
• 第一部分 PCR 技术鉴别华支睾吸虫与扇棘单睾吸虫方法的建立13-26
• 1. 材料与方法13-19
• 2. 结果19-23
• 3. 讨论23-26
• 第二部分 PCR 技术鉴别华支睾吸虫与扇棘单睾吸虫方法的应用26-34
• 1. 材料与方法26-29
• 2. 结果29-32
• 3. 讨论32-34
• 结论34-35
• 参考文献35-39
• 附录39-47
• 综述47-62
• 参考文献54-62
• 论文鸣谢62-63
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录63

【参考文献】

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1 杨益超;李树林;谭裕光;K.S.Eom;许洪波;吴钦华;区方奇;商少明;;广西肝吸虫流行区人群及淡水鱼扇棘单睾吸虫感染调查[J];应用预防医学;2012年02期

2 陈守义,余新炳,徐劲,虢国泰,蒋忠军,吴德,胡旭初,李军涛;华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定[J];热带医学杂志;2003年01期

3 林金祥;李莉莎;陈宝建;程由注;朱凯;张榕燕;李友松;;人体5种小型吸虫病原形态观察[J];热带医学杂志;2006年02期

4 陈宝建;李莉莎;张榕燕;李燕榕;林陈鑫;郑国斌;方彦炎;;福建省寄生虫种质资源平台医学软体动物的种群分类整理[J];热带医学杂志;2011年02期

5 胡裕清;赵树进;;RAPD技术及其在植物研究中的应用[J];生物技术通报;2010年05期

6 陈元晓;张闻;田明;陈英杰;王文林;张乃光;;云南省寄生虫中间宿主螺类调查[J];中国病原生物学杂志;2009年03期

7 张辉;杨毅梅;;PCR-RAPD技术在医学蠕虫研究中的应用进展[J];中国病原生物学杂志;2009年12期

8 黎学铭,杨益超,蓝春庚,谭裕光,黄铿凌,许洪波,林睿;广西发现扇棘单睾吸虫[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2004年01期

9 余森海;;“传统”寄生虫学的传承与发展[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2007年03期

10 方悦怡;陈颖丹;黎学铭;吴军;张启明;阮彩文;;我国华支睾吸虫病流行区感染现状调查[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2008年02期

本文编号：697892