血小板衍生生长因子C腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达

发布时间：2017-08-19 21:30

  本文关键词：血小板衍生生长因子C腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达

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【摘要】：目的：构建含大鼠血小板衍生生长因子C（PDGF-C）基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重组腺病毒表达载体，体外转染骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）并观察目的基因蛋白及mRNA表达。 方法：通过RT-PCR法从pIRES2-EGFP-PDGF-C真核表达载体中获得PDGF-C目的片段，经BP重组插入中间载体pDONR221，，再经过LR重组到pAd/CMV/V5-DEST，构建pAd-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒载体。酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293A包装、纯化，测定病毒滴度后转染大鼠骨髓源性EPCs，应用Real-time qPCR、Western blot等方法检测PDGF-C蛋白及mRNA的表达。 结果：核酸内切酶消化及PCR分析证实PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒载体，转染后荧光显微镜下观察可见绿色荧光蛋白表达,转染48h后Real-time qPCR测定EPCs中PDGF-C含量明显提高（P0.05），Wester blot检测证实在46kD存在特异性条带。 结论：成功构建了大鼠PDGF-C基因的腺病毒表达载体pAD-EGFP-PDGF-C，体外转染大鼠骨髓源性EPCs能高效表达目的基因产物，为后续研究PDGF-C基因功能以及进一步开展基因治疗奠定了基础。
【关键词】：血小板衍生生长因子C 腺病毒载体 内皮祖细胞 转染
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-11
• 1 材料与方法11-18
• 1.1 材料与仪器11-12
• 1.2 实验过程与方法12-17
• 1.3 统计学方法17-18
• 2 结果18-20
• 3 讨论20-23
• 总结23-24
• 参考文献24-26
• 附图、附表26-30
• 文献综述30-42
• 参考文献37-42
• 致谢42-43
• 攻读学位期间发表的文章43-44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 况春燕;黄岚;喻杨;邓梦杨;王逵;钱德慧;;提高培养内皮祖细胞成功率的探讨[J];重庆医学;2011年32期

2 廖少华;陈康宁;周振华;;内皮祖细胞及其在脑梗死中的应用进展[J];重庆医学;2012年02期

3 栾朝霞,高沁怡,裴著果;白介素-1和血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响[J];中国医科大学学报;2003年06期

4 欧阳晓玲;李爱玲;宁启兰;杨旭东;许楠;王慧莲;;人过氧化氢酶基因重组腺病毒的构建及其酶活性的测定[J];浙江大学学报(医学版);2011年03期

5 郭文潮;于悦卿;郝玉宾;;血小板源性生长因子提高血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2活性的机制[J];中国现代医学杂志;2011年27期

本文编号：703103