CD11c单抗修饰载OVA免疫脂质体的制备及其对树突状细胞作用的研究

发布时间：2017-08-21 21:17

  本文关键词：CD11c单抗修饰载OVA免疫脂质体的制备及其对树突状细胞作用的研究

  更多相关文章： CD11c 免疫脂质体 树突状细胞 OVA 靶向性

【摘要】：树突状细胞(Dendritic cells, DCs)是体内功能最强的专职抗原提呈细胞,在免疫系统对抗原的捕获、处理及提呈过程中居于中心地位,它能同时激发初始性和获得性免疫应答,由于其在机体的抗感染免疫及抗肿瘤免疫应答中的作用极其重要而成为近年来免疫学研究的热点。而CDllc是确定的DCs特异表面标志之一,在未成熟DCs(iDCs)和成熟DCs (mDCs)中均有较高的表达。大量研究也证实CDllc可作为有效的靶标,介导抗原的内吞,促进DCs特异性免疫应答。 脂质体作为药物载体,主要由磷脂构成,具有类细胞膜结构,易与细胞磷脂双分子层相融合。它拥有载药量大、保护被包封药物免遭降解,缓释、减少用药剂量等优点,能够提高药物的治疗指数,改变包封药物的体内分布,在许多疾病治疗中显示出了明显的优越性,因此我们选取脂质体(liposomes)作为载药载体。为了克服脂质体同时存在的转染效率低、靶向性差等缺点,因此我们构建了以DCs表面分子CDllc为靶标的包裹模型抗原卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)的免疫脂质体(immunoliposomes modified by CD11c mAb parcel of OVA, CD11c-OVA-imliposomes),通过在包裹OVA的脂质体表面共价键结合特异性针对CDllc单克隆抗体的方法,利用单克隆抗体与CDllc分子的特异性结合,提高包裹OVA脂质体对DCs的特异靶向性和亲和能力,达到提高转染效率,介导抗原的内吞,促进包裹抗原特异性免疫应答的作用。为使单克隆抗体与脂质体有效结合并更好的保持单抗的生物活性,我们采用将马来酰亚胺-甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰甘油磷脂酰乙醇胺(Mal-PEG2000-DSPE)嵌入到脂质体材料中,通过巯基化试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐(2-IT)处理CD11c单克隆抗体,使单抗末端发生巯基化,然后再通过马来酰亚胺基团和巯基化的CDllc单抗在温和的条件下产生有效连接。 在完成CD11c-OVA-imliposomes构建和制备的基础上,本文对其粒径、Zeta电位、包封率和CDllc单抗的连接效率等药剂学指标进行了全面的考察和评价。采用电子透射电镜(TEM)和纳米粒径测定仪(DLS)对OVA-liposomes和CD11c-OVA-imliposomes的粒径、Zeta电位、表面形态等性质进行表征,结果显示脂质体表面光滑、多为圆形、少许椭圆形,无粘连,粒径分布均匀,平均粒径在145-160nm范围,与OVA-liposomes相比较,CD11c-OVA-imliposomes的粒径增大(146nm→159nm), OVA-liposomes Zeta电位为(-33.6±1.1) mv, CD11c-OVA-imliposomes Zeta电位为(-31.2±1.7)mv,粒径和电位的变化可能由CD11c单抗连接于脂质体表面所引起；采用高效液相色谱法测定OVA-liposomes包封率为(32.5±1.9)%CD11c-OVA-imliposomes表面CDllc单抗活性良好,且连接效率为(77.6±3.2)%。 我们采用流式细胞仪(FCM)定量、激光共聚焦显微镜(LSCM)定性检测的方法对CD11c-OVA-imliposomes在体外特异性DCs靶向能力进行的测定,结果表明,CD11c-OVA-imliposomes具有对DCs特异性的靶向作用。我们还通过流式细胞仪检测了OVA-liposomes和CD11c-OVA-imliposomes的刺激对DCs表面表达I-Ab、CD40、CD80、 CD86等表型成熟相关因子的影响,发现二者与DCs作用后对I-Ab、CD40、CD80、CD86等表面分子的表达均有不同程度的促进作用,其中CD11c-OVA-imliposomes较OVA-liposomes促进程度更高,表明CD11c-OVA-imliposomes可以更有效的促进DCs的表型成熟,促进其更好的发挥抗原提呈功能。 本研究成功的制备了有效包裹OVA蛋白可特异性靶向DCs的免疫脂质体CD11c-OVA-imliposomes,并对其性能进行了表征,证明了CD11c-OVA-imliposomes对DCs的特异靶向性,并发现该特异性靶向的免疫脂质体可有效促进DCs细胞表面I-Ab、CD40、CD80、CD86等成熟相关表面分子的表达,促进DCs的表型成熟。
【关键词】：CD11c 免疫脂质体 树突状细胞 OVA 靶向性
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文缩写10-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-18
• 结果18-21
• 附图21-28
• 附表28-30
• 讨论30-32
• 结论32-34
• 参考文献34-40
• 综述40-48
• 参考文献45-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 徐曼;徐光绪;王渝琦;戴明q，

本文编号：715167