锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡

发布时间：2017-08-24 02:40

  本文关键词：锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡

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【摘要】：目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响。结果扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24 h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染p EGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加。结论在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡。
【作者单位】： 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心;
【关键词】： 卡介苗 锌依赖的金属蛋白酶(Zmp) 真核表达 RAW.细胞 细胞凋亡
【基金】：重庆市自然科学基金(cstc2012jj A10023)
【分类号】：R392
【正文快照】： 结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的以呼吸道病变为主的一种慢性传染病。据世界卫生组织最新统计,仅2013年约900万例新发结核病病例,约150万人死亡[1]。卡介苗(BacillusCalmette Guerin vaccine,BCG)是使用最广泛、最安全的预防结核病的唯一疫苗,

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本文编号：728762