氯化血红素对大鼠肺微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

发布时间：2017-08-24 13:31

  本文关键词：氯化血红素对大鼠肺微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

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【摘要】：【目的】①建立大鼠肺微血管内皮细胞的培养方法。②探讨氯化血红素(hemin)对过氧化氢（H2O2）诱导大鼠肺微血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及可能机制，为临床提供实验依据。 【方法】1.选取体重约为150g-200g的健康SD雄性大鼠，无菌状态下快速剪取大鼠肺组织，应用肺组织颗粒贴壁法获得PMVECs（pulmonarymicrovas-cularendothelialcells,肺微血管内皮细胞），同时进行大鼠肺微血管内皮细胞的原代以及传代培养；通过倒置显微镜观察所培养细胞的外形及状态，Ⅷ因子相关抗原免疫荧光法进行细胞鉴定。2.应用H_2O_2构建肺微血管内皮细胞氧化应激损伤模型，并用氯化血红素（hemin）与H_2O_2共同孵育肺微血管内皮细胞。选用生长状态良好的内皮细胞，随机分五组：1.正常对照组；2.200umol/lH_2O_2组；3.200umol/lH_2O_2+2.5umol/lhemin组；4.200umol/lH2O2+5umol/lhemin组；5.200umol/lH_2O_2+10umol/lhemin组。在H_2O_2作用细胞前4小时加入不同浓度的hemin，随后再加200umol/lH_2O_2孵育4小时，而后终止实验收集各组细胞及上清液；3.采用MTT比色法检测各组细胞生长抑制率的变化，用化学比色法检测各组内皮细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量；4.Western-blot检测各组内皮细胞LC-3和Beclin-1的蛋白量，同时观察不同浓度hemin对血红素氧合酶1（HO-1）表达的诱导作用。 【结果】1.体外培养的大鼠PMVECs的形态呈圆形、多角形、椭圆形梭形等不规则形态,形成单层紧密排列时呈典型的铺路石样或鹅卵石样排列,免疫荧光检测FITC标记的Ⅷ相关抗体呈阳性，成功建立了PMVECs的原代培养方法；2.H2O2使内皮细胞活力下降，且成剂量依赖性，200umol/LH2O2使内皮细胞活力下降50%，把200umol/lH_2O_2作为建模浓度；3与正常对照组相比，200umol/lH_2O_2组细胞生长状态较差，细胞活力减低，，LDH释放量增高，不同浓度hemin预处理后，可较大程度地逆转上述指标变化，并呈现剂量依赖性。4.与正常对照组相比，200umol/lH_2O_2组细胞LC-3Ⅱ和Beclin-1蛋白表达水平明显增高，不同浓度hemin预处理后可较大程度地减低LC-3Ⅱ和Beclin-1蛋白表达量，与200umol/lH2O2组相比均具有显著差异（P0.05），并呈现一定的浓度依赖性。5.不同浓度组的Hemin均能使内皮细胞HO-1的表达增高，有剂量依赖性。 【结论】1.H_2O_2可以诱导肺微血管内皮细胞损伤；2.低浓度hemin对H_2O_2诱导的肺微血管内皮细胞氧化应激损伤有保护作用，这种保护作用可能是与氯化血红素诱导内皮细胞过表达血红素氧合酶1（HO-1）和抑制过氧化氢诱导内皮细胞过度自噬有关。
【关键词】：氯化血红素 血红素氧合酶1 肺微血管内皮细胞 过氧化氢 自噬
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329
【目录】：

• 目录4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• ABBREVIATION9-10
• 前言10-12
• 一．大鼠肺微血管内皮细胞的原代培养及鉴定12-19
• 材料与方法12-16
• 结果16-17
• 讨论17
• 参考文献17-19
• 二．氯化血红素对肺微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用19-31
• 材料与方法19-25
• 结果25-27
• 讨论27-29
• 参考文献29-31
• 附录31-37
• 综述37-45
• 参考文献41-45
• 个人简历45
• 在校期间发表的论文45-46
• 致谢46

【参考文献】

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1 孟革;赵建;吕新怀;丁日高;;大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法的改进[J];军事医学科学院院刊;2009年06期

2 李敏;杨明会;刘毅;;大鼠肺微血管内皮细胞培养方法的对比和改进[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年31期

本文编号：731580