大鼠门静脉高压食管静脉曲张模型中内皮祖细胞的变化及意义

发布时间：2017-08-25 08:47

  本文关键词：大鼠门静脉高压食管静脉曲张模型中内皮祖细胞的变化及意义

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【摘要】：目的：制作大鼠肝前性门静脉高压症食管静脉曲张模型及内皮祖细胞的分离、鉴定和培养。 方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组、对照组和模型组。模型组大鼠显微镜下游离，结扎并离断左肾上腺静脉，完全游离全长左肾静脉并清除左肾周围脂肪组织；游离门静脉主干，将8-9号注射器针头与门静脉主干并行，结扎后抽出针头形成门静脉缩窄。对照组仅处理左肾上腺静脉。假手术组仅开腹探查。2周、4周后剖杀大鼠并测门静脉压力。留取肝脏、食管胃底组织，液氮冻存，另一部分石蜡包埋并切片HE染色。抽取门静脉血，Ficoll分离单个核细胞，EGM-2培养液诱导培养EPC。CD133和VEGFR2免疫细胞化学鉴定。计算并比较各实验组间EPC的数量。 结果：模型组大鼠门脉压力显著高于对照组和假手术组,肉眼下及镜下可见食管胃底静脉曲张明显。原代培养后可见EPC形成克隆，培养2-3周后可见明显具有典型EPC特征的细胞集落形成，培养的细胞表达EPC表面标志物CD133和VEGF2-R。模型组EPC数量明显高于对照组。 结论：采用门静脉缩窄的方法，，有效建立了大鼠门静脉高压症食管静脉曲张模型。EGM-2培养液培养外周血单个核细胞可以获得内皮祖细胞。内皮祖细胞的水平可能与门静脉高压血管病变有关。 目的：检测各实验组大鼠食管组织中CD133与VFGF的表达，检测大鼠不同阶段血清中及食管组织匀浆液中VEGF的表达。 方法：将各组大鼠按不同时间点剖杀取材，取食管组织一部分制作石蜡切片，一部分加裂解液匀浆。门静脉采血离心收集血清。石蜡切片的食管组织HE染色后，Nikon Digital ECLIPSE C1system共聚焦显微镜下拍照并用Image-Pro Plus6.0软件分析，计算食管粘膜下静脉的密度及面积百分比。采用免疫组织化学方法检测食管组织中CD133与VEGF的表达，双抗夹心法ELISA检测大鼠血清及食管匀浆液中VEGF蛋白水平。 结果：(1)静脉曲张模型组中食管粘膜下血管密度明显高于对照组，EPC细胞克隆数量与食管粘膜下静脉数量/食管粘膜下层面积百分比，以及食管粘膜下静脉面积/食管粘膜下层面积百分比均有显著直线相关性。(2)门静脉高压症食管静脉曲张模型组大鼠食管粘膜下血管可见CD133和KDR阳性的内皮细胞，假手术组大鼠未见CD133和KDR阳性内皮细胞。(3)组织VEGF水平在各组间差异没有统计学意义，实验组术后第4周血清VEGF水平明显上调。 结论：CD133和KDR阳性的内皮祖细胞可能参与了大鼠门静脉高压模型中曲张静脉的形成。血清VEGF水平上调，可能促进EPC参与部分食管曲张静脉的形成。
【关键词】：门静脉缩窄 门静脉高压 大鼠模型 内皮祖细胞 CD133 VEGF 免疫组织化学 ELISA
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R575.2
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一部分 肝前性门静脉高压大鼠模型的建立10-20
• 前言10
• 材料和方法10-17
• 讨论17-18
• 参考文献18-20
• 第二部分 食管粘膜下组织 CD133 和 KDR 的表达及意义20-32
• 前言20
• 材料和方法20-29
• 讨论29-30
• 参考文献30-32
• 综述32-37
• 参考文献37-43
• 致谢43

【参考文献】

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1 韩德五;马学慧;赵元昌;;肝硬化动物模型的研究[J];山西医药杂志;1979年04期

2 陈治,张莉,黄宗海;VEGF基因表达调控机制的研究进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2000年03期

3 赵春华,郭虹,曹德骏;早期内皮细胞发育与相关干细胞分化的研究进展[J];中华血液学杂志;2001年12期

本文编号：736145