鱼藤酮建立帕金森病细胞模型的方法研究

发布时间：2017-08-27 12:05

  本文关键词：鱼藤酮建立帕金森病细胞模型的方法研究

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【摘要】：目的探讨鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞建立帕金森病(Parkinson disease,PD)细胞模型的方法。方法实验分为空白对照组及鱼藤酮0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L组共5组,各组分别于鱼藤酮加入24h、48h点,观察SH-SY5Y细胞形态变化,采用MTT比色法检测细胞活力;于24h时采用Western blot法检测细胞α-突触核蛋白(α-synuclein)表达量;对空白对照组及鱼藤酮0.5μmol/L、1.0μmol/L组于24h、48h行HE染色观察细胞内包涵体形成情况。以激光共聚焦免疫荧光法观察鱼藤酮1.0μmol/L组24h时α-synuclein的分布情况。结果空白对照组细胞生长较密,神经突起细长;在鱼藤酮药物组24时,0.5μmol/L组细胞突起变短,1.0μmol/L组细胞突起短缩更明显,2.5μmol/L组胞体肿胀明显,5.0μmol/L组圆缩细胞增多;各浓度组48h时与24h时比较,细胞突起变短、细胞肿胀、圆缩更明显。MTT试验显示1.0μmol/L鱼藤酮24h组和0.5μmol/L鱼藤酮48h组分别使细胞活性下降到空白对照组的(86.06±9.06)%和(62.06±7.13)%,与对照组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示鱼藤酮0.5、1.0、2.5和5.0μmol/L组SH-SY5Y细胞内α-synuclein相对表达水平分别为(1.23±0.11)、(1.41±0.20)、(1.77±0.09)和(1.31±0.28),其中1.0μmol/L、2.5μmol/L鱼藤酮组α-synuclein水平高于空白对照组(P0.05);HE染色显示,在1.0μmol/L鱼藤酮24h组和0.5μmol/L鱼藤酮48h组均观察到细胞质内出现嗜伊红、边界清楚的类路易小体样包涵体;免疫荧光染色显示在1.0μmol/L鱼藤酮24h组观察到细胞内出现颗粒状α-synuclein免疫染色阳性聚集体,可被Thioflavin S共定位。结论 1.0μmol/L鱼藤酮24h诱导SH-SY5Y细胞所建立的PD模型能够很好地模拟PD病理改变,可作为研究PD发病机制的细胞模型。
【作者单位】： 福建医科大学附属第二医院神经内科;华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科;
【关键词】： 帕金森病 鱼藤酮 凋亡 路易小体 α-突触核蛋白
【基金】：泉州市科技局科技计划重点项目(2014Z45) 福建省卫生计生委青年科研课题(2014-1-67) 福建省自然科学基金青年创新项目(2015J05148)
【分类号】：R742.5;R-332
【正文快照】： 帕金森病(Parkinson disease,PD)是中老年人群中常见的一种神经变性疾病,其最重要的病理变化是黑质多巴胺能神经元选择性缺失和残存神经元中出现以α-突触核蛋白(α-synuclein)为主要成分的路易小体和路易轴突。目前认为其发生是遗传变异、环境暴露以及年龄等多个因素相互作用

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