海马CB1受体在rTMS改善CUMS模型大鼠抑郁样行为中的作用

发布时间：2017-08-30 08:35

  本文关键词：海马CB1受体在rTMS改善CUMS模型大鼠抑郁样行为中的作用

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【摘要】：研究目的： 本研究的主要目的是应用慢性不可预见性温和应激（chronic unpredictable mildstress, CUMS）的抑郁模型大鼠进行研究，探讨海马区域的内源性大麻素Ⅰ型受体（cannabinoid type1receptor, CB1）信号传递的改变是否是重复性经颅磁刺激（repetitive transcranial magnetic stimulation, rTMS）改善CUMS模型大鼠抑郁样行为的基础之一。 研究方法： 本研究共分两部分进行：实验一为观察rTMS干预对CUMS抑郁模型大鼠的抑郁样行为及海马CB1受体的影响；实验二为应用CB1受体拮抗剂AM251干预后，观察rTMS对CUMS抑郁模型大鼠的抑郁样行为及海马神经保护与神经发生的影响。 在实验一部分，动物被随机分为四组：（1）阴性对照组，实验大鼠常规饲养3周后，给予rTMS假性刺激1周；（2）对照+rTMS组，实验大鼠常规饲养3周后，给予rTMS干预1周；（3）CUMS模型组，实验大鼠给予CUMS处理3周，之后给予rTMS假性刺激1周；（4）CUMS+rTMS组，实验大鼠给予CUMS处理3周，之后给予rTMS治疗1周。 在实验二部分，动物被随机分为六组：（1）阴性对照组，实验大鼠常规饲养3周后，给予rTMS假性刺激1周；（2）CUMS模型组，实验大鼠给予CUMS处理3周，之后给予rTMS假性刺激1周；（3）CUMS+rTMS组，实验大鼠给予CUMS处理3周，之后给予rTMS治疗1周；（4）CUMS+rTMS+AM251组，实验大鼠给予CUMS处理3周，之后给予rTMS治疗1周，并在每次治疗前30min腹腔注射AM251，注射剂量为1mg/kg；（5）CUMS+AM251组，实验大鼠给予CUMS处理3周，，之后给予rTMS假性刺激1周，并在每次假性刺激前30min腹腔注射AM251，注射剂量为1mg/kg；（6）CUMS+rTMS+对照溶剂组，实验大鼠给予CUMS处理3周，之后给予rTMS治疗1周，并在每次治疗前30min腹腔注射生理盐水，注射剂量为0.6ml/kg（DMSO：生理盐水=1:4）。 观察指标包括两个方面：1.行为学观察包括糖水偏好实验、强迫游泳实验和旷场实验；2.海马CB1受体的表达及海马神经保护与神经发生的观察，采用免疫组织化学方法及蛋白质印迹法(Westernblot)进行检测。 结果： 在实验一部分，实验动物经CUMS处理后出现抑郁样行为并且海马CB1受体的表达下调；而经rTMS治疗后，抑郁模型大鼠的抑郁样行为得到改善并且海马CB1受体的表达上调。具体结果如下： 1．与阴性对照组相比，CUMS处理后大鼠的糖水偏好值减小（P 0.05）；强迫游泳不动时间延长（P 0.01）；在旷场实验中的水平运动距离减少（P 0.01），进入中央区次数减少（P 0.01）；免疫组织化学染色及Westernblot检测结果均表明海马CB1受体表达下调（P均0.01）。 2.与CUMS组相比，经rTMS治疗后大鼠的糖水偏好值增加（P 0.05）；强迫游泳不动时间减少（P 0.05）；在旷场实验中的水平运动距离增加（P 0.05），进入中央区次数增多（P 0.05）；免疫组织化学染色及Westernblot检测结果均表明海马CB1受体表达下调，（P均0.01）。 在实验二部分，我们发现rTMS治疗能促进CUMS模型大鼠海马的神经发生与神经保护，而应用CB1受体拮抗剂AM251不仅可以阻断rTMS的这一效应，而且还抑制了rTMS的抗抑郁效应。具体结果如下： 1.与CUMS+rTMS组相比，CUMS+rTMS+AM251组大鼠的糖水偏好值减小（P 0.05）；强迫游泳不动时间延长（P 0.05）；在旷场实验中，水平运动距离减少（P 0.05），进入中央区次数减少（P 0.05）。CUMS+rTMS组与CUMS+rTMS+对照溶剂组上述各指标的比较均无统计学差异（P0.05）；CUMS组，CUMS+rTMS+AM251组与CUMS+AM251组上述各指标的比较亦无统计学差异（P0.05）。 2.与CUMS组相比，经rTMS治疗后大鼠的海马BrdU阳性细胞数目增多（P 0.01）；BDNF表达上调（P 0.05）；Bcl-2表达上调（P 0.05）；Bax表达下调（P 0.05）；与CUMS+rTMS组相比，CUMS+rTMS+AM251组大鼠的海马BrdU阳性细胞数目减少（P 0.01）；BDNF表达下调（P 0.01）；Bcl-2表达下调（P 0.01）；Bax表达上调（P 0.05）；CUMS+rTMS组与CUMS+rTMS+对照溶剂组相比，大鼠的海马BrdU阳性细胞数目、BDNF、Bcl-2、Bax的表达无统计学差异（P0.05）；CUMS组，CUMS+rTMS+AM251组与CUMS+AM251组相比，大鼠的海马BrdU阳性细胞数目、BDNF、Bcl-2、Bax的表达无统计学差异（P0.05）。结论： CUMS模型大鼠会表现出类似于抑郁症患者的抑郁样行为，而rTMS治疗能改善这种行为表现，但是，应用CB1受体拮抗剂AM251可以阻断rTMS这一效应。以上结果表明，rTMS可能是通过激活海马的CB1受体，促进海马的神经发生与神经保护，进而发挥抗抑郁效应的。
【关键词】：抑郁症 重复性经颅磁刺激 慢性不可预见性温和应激 内源性大麻素Ⅰ型受体 海马 大鼠
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R749.4
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-15
• 文献回顾15-29
• 实验一 观察重复性经颅磁刺激对 CUMS 大鼠的抑郁样行为及海马内源性大麻素CB1 受体表达的影响29-45
• 1. 材料29-32
• 1.1 实验动物29
• 1.2 免疫组化及免疫印迹相关抗体及试剂盒29-30
• 1.3 常用试剂及缓冲液配置30-32
• 1.4 主要仪器和器材32
• 2. 方法32-39
• 2.1 CUMS 模型构建32-34
• 2.2 实验分组及实验流程34
• 2.3 rTMS 干预方法34-35
• 2.4 动物行为学检测方法35-36
• 2.5 免疫组织化学染色方法36-37
• 2.6 Western-Blot 方法37-38
• 2.7 统计分析38-39
• 3. 结果39-43
• 3.1 糖水摄取实验结果39
• 3.2 强迫游泳结果39-40
• 3.3 旷场实验结果40-41
• 3.4 免疫组织化学结果41-43
• 3.5 Western-Blot 结果43
• 4. 讨论43-45
• 实验二 内源性大麻素的 CB1 受体在重复性经颅磁刺激发挥抗抑郁效应中的作用45-58
• 1. 材料45-46
• 1.1 实验动物45-46
• 1.2 试剂及主要仪器46
• 1.3 干预药物46
• 2. 方法46-49
• 2.1 CUMS 模型构建46-47
• 2.2 实验分组及实验流程47-48
• 2.3 rTMS 干预方法48
• 2.4 动物行为学检测方法48
• 2.5 免疫组织化学染色方法48-49
• 2.6 Western-Blot 方法49
• 2.7 统计分析49
• 3. 结果49-56
• 3.1 AM251 干预阻断了 rTMS 治疗改善 CUMS 大鼠抑郁样行为的作用49-52
• 3.2 AM251 干预阻断了 rTMS 促进 CUMS 大鼠海马神经发生的作用52-53
• 3.3 AM251 干预阻断了 rTMS 促进 CUMS 大鼠海马神经保护的作用53-56
• 4. 讨论56-58
• 小结58-59
• 参考文献59-69
• 个人简历和研究成果69-70
• 致谢70

【共引文献】

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1 刘sボ

本文编号：758310