人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-08-30 10:20

  本文关键词：人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定

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【摘要】：目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-GrnF免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,用ELISA筛选阳性克隆,并采用有限稀释法进行亚克隆;采用免疫荧光染色及Westernblot法对所获得的mAb的特异性进行鉴定,并用抗体亚类测定试剂盒检测所获得单克隆抗体亚类。结果成功获得2株可分泌特异性抗GrnF的杂交瘤细胞株(1G6及4E8),经鉴定这2株抗体重链亚类均为IgG1亚类。结论成功制备了抗人GrnF片段结构域的单克隆抗体。
【作者单位】： 陕西师范大学生命科学学院秦巴山区可持续发展协同创新中心;
【关键词】： 颗粒前体蛋白 Grn F 酵母表达载体 杂交瘤 单克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(81272543,81301957,81471772) 陕西省自然科学基金重点项目(2014JZ005) 中央高校基金项目(GK201301010)
【分类号】：R392;Q813.2
【正文快照】： 颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)是一种分子量约为88 ku的分泌性糖蛋白,由颗粒蛋白(granulin,GRN)基因编码。PGRN在多种人类肿瘤,如乳腺癌、卵巢癌、肝癌和胃癌中高表达,并在肿瘤细胞生长、侵袭和肿瘤组织血管生成等方面发挥重要的作用。PGRN通过促进细胞增殖、减少细胞凋亡以

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本文编号：758729