细胞型朊蛋白在不同月龄小鼠视网膜中表达的实验研究

发布时间：2017-08-30 12:09

  本文关键词：细胞型朊蛋白在不同月龄小鼠视网膜中表达的实验研究

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【摘要】：目的： 通过观察细胞型朊蛋白（cellular prion protein, PrP~c）在2周龄，9月龄，18月龄正常ICR小鼠视网膜中的基因表达情况和蛋白表达情况，分析小鼠视网膜中PrP~c的表达与月龄的关系。并观察分析18月龄小鼠视网膜组织与大脑组织PrP~c的表达含量的差异。为后续开展PrP~c与阿尔茨海默病(AD)和视觉病变间的关系提供实验依据。 方法： 选取2周龄，，9月龄，18月龄健康ICR小鼠，每月龄段20只，雌雄各半。充分暴露眼球于眼缘，离断眼球后极部的视神经，利用显微器械轻柔迅速的取出视网膜，将视网膜放入EP管内，于-80°冻存。分别使用逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)技术检测各组视网膜组织中PrP~c基因的表达情况；蛋白质印迹法(Western Blot, WB)技术检测各组小鼠视网膜组织中PrP~c蛋白的表达情况。上述两种方法分别检测β-actin表达作为内参因子。分析小鼠视网膜中PrP~c的表达水平与月龄的关系及18月龄小鼠视网膜与大脑组织PrPc的表达含量的差异。 结果： 1、各月龄段小鼠样本组织中内参因子β-actin的表达较稳定，不随月龄变化而改变，证实本研究所用PCR及Western Blot技术稳定可靠，无明显操作误差； 2、2周龄、9月龄、18月龄小鼠视网膜中PrP~c基因表达水平随月龄增大而逐渐增强，各月龄段PrP~c表达水平比较均有显著性差异（P0.01）；各月龄段小鼠视网膜中PrP~c蛋白表达水平亦随月龄增大而增强，各组比较均有显著性差异（P0.01）； 3、18月龄组小鼠脑组织中PrP~c表达水平高于同组视网膜的表达水平，其差异有统计学意义（P0.01）。 结论： 在正常小鼠视网膜中存在PrP~c蛋白基因的表达，且表达水平随着小鼠月龄的增加而逐渐增强，但弱于脑组织中的PrP~c的表达强度。
【关键词】：细胞型朊蛋白 视网膜 ICR小鼠 β-淀粉样蛋白
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 中英文缩略词表8-9
• 第1章 前言9-12
• 第2章 材料与方法12-19
• 2.1 实验材料12-13
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 主要试剂12-13
• 2.1.3 主要仪器与设备13
• 2.2 实验方法13-19
• 2.2.1 小鼠组织标本取材13-14
• 2.2.2 RT-PCR 检测小鼠组织表本中 PRP_C 基因的表达14-16
• 2.2.3 WB 检测小鼠组织标本中 PRP_C 蛋白的表达16-18
• 2.2.4 内参因子的设置18
• 2.2.5 统计学处理18-19
• 第3章 结果19-24
• 3.1 Β-ACTIN19-20
• 3.2 PRP_C（RT-PCR 结果）20-22
• 3.3 PRP_C（WB 结果）22-24
• 第4章 讨论24-27
• 第5章 结论27-28
• 致谢28-29
• 参考文献29-33
• 附图33-37
• 攻读学位期间的研究成果37-38
• 综述38-45
• 参考文献42-45

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