胚胎中脑神经干细胞的培养及分化条件探讨
本文关键词：胚胎中脑神经干细胞的培养及分化条件探讨
【摘要】：目的:探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的培养方法以及各种条件对NSCs生长状况的影响。方法:取SD大鼠胚胎中脑,在含细胞因子碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)和内皮细胞生长因子(epidermal growth factor,EGF)的无血清培养基中培养扩增,得到的神经球用神经巢蛋白nestin抗体鉴定和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brdu)掺入检测增殖能力。血清诱导分化后用免疫荧光做星形胶质细胞酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神经元特异性Ⅲ型微管蛋白(neuron-specific classⅢβ-tubulin,β-Ⅲ-tublin)的双标检测。研究进一步观察了细胞因子b FGF和EGF单用及合用对克隆形成数量的影响及不同接种密度和白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对细胞生长的影响。结果:神经球nestin免疫荧光表达显示强阳性;Brdu掺入实验显示神经球细胞具有很好的增殖能力;分化后免疫双标结果得到了GFAP(68.32±5.70)%和β-Ⅲ-tublin(21.65±3.40)%的阳性表达;当2种因子同时存在时细胞克隆数量优于单因子作用组(P㩳0.05,与EGF组比较;P0.01,与b FGF组比较);与对照组比较LIF作用组细胞数量明显增多(F=2 630.114,P=0.000);细胞接种密度对神经球的数量有明显影响(F=155.100,P=0.001),在(0.5~16.0)×105个/ml密度范围内,神经球数量随着接种密度增加而增加。结论:b FGF和EGF 2种细胞因子对NSCs的生长是必须的;长期传代过程中LIF能促进NSCs的生长;NSCs生长有密度依赖性,但接种密度应该控制在适宜范围内。
【作者单位】： 重庆医科大学干细胞与组织工程研究所干细胞研究平台;重庆医科大学附属第二医院神经内科;
【关键词】： 神经干细胞 细胞培养 分化 白血病抑制因子
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:31100985) 重庆市自然科学基金资助项目(编号:cstc2010BB5096)
【分类号】：R321
【正文快照】： 研究证实,在胚胎脑和成年脑内均存在具有自我更新能力和多项分化潜能的神经干细胞(neuralstem cells,NSCs)[1],能分化产生神经元和神经胶质细胞。胚胎期的一部分神经干细胞以非增殖的静态方式长期存在于神经系统中。神经干细胞的体外获取可通过直接从神经组织分离培养、其他来
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘暌,王忠诚,张亚卓;神经干细胞研究现状及应用展望[J];中华神经外科杂志;2000年06期
2 刘辉,杨树源;神经干细胞及其临床应用前景[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2000年01期
3 刘泉开;神经干细胞研究进展[J];现代诊断与治疗;2000年05期
4 张世馥,田竟生;神经干细胞研究进展[J];中国基础科学;2000年10期
5 汪璇,张浣清,朱艳霓,沈丽,李凌松;神经干细胞研究新进展及临床应用展望[J];北京大学学报(医学版);2001年06期
6 李劲涛,冯忠堂,王廷华;成年脑内神经干细胞的研究进展[J];神经解剖学杂志;2001年04期
7 徐迎胜,樊东升;神经干细胞及其临床应用前景[J];神经疾病与精神卫生;2002年01期
8 张宏,王玮;神经干细胞分化研究进展[J];中国局解手术学杂志;2002年04期
9 郑学胜,朱晓峰;抗体封闭膜受体方法在神经干细胞研究中的应用[J];黑龙江医药科学;2002年05期
10 姜晓丹,徐如祥,柯以铨,杨志林,张世忠;神经干细胞分化调节机制[J];中国临床神经科学;2002年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 魏勇;应大君;张伟;董世武;;幼龄家猪脑SVZ神经干细胞的分离与鉴定[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
2 李力;万琪;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
3 李力;万琪;刘永红;张巍;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
4 黄兵;司银楚;;成年动物脑内神经干细胞的分化调控机制[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2004年
5 吴承远;朱树干;;加强神经干细胞内移植治疗中枢神经系统疾病的研究[A];中国医师协会神经外科医师分会首届全国代表大会论文汇编[C];2005年
6 杨小锋;郑学胜;刘伟国;冯军峰;胡未伟;李谷;罗鸣;陈向日;;神经干细胞团的悬浮不稳定性及其解决方法[A];2005年浙江省神经外科学术会议论文汇编[C];2005年
7 于龙刚;李娜;姜彦;解凤阳;张晓雯;;猫胚胎源性神经干细胞的分离、培养及鉴定的研究[A];全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2012年
8 夏立广;李仲荣;刘淼清;王永飚;朱利斌;赵一鸣;;两种不同来源神经干细胞的神经递质表达研究[A];2013年浙江省医学会小儿外科学学术年会暨分会成立30周年庆典论文汇编[C];2013年
9 李文涛;;中医药对神经干细胞增分化作用的研究现状[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
10 徐富翠;梅欣明;杨晓红;;神经干细胞培养影响因素探讨[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;我国科学家成功地在体外培养出神经干细胞[N];中国高新技术产业导报;2001年
2 沈丽 付钰;神奇的神经干细胞[N];科技日报;2002年
3 时仲省 高思敏 刘春阳;河南医大成功培养人胚神经干细胞[N];中国医药报;2001年
4 梓华;神经干细胞可治恶性脑癌[N];医药经济报;2002年
5 胡德荣;“抑制蛋白”可控制神经干细胞提前分化[N];健康报;2007年
6 许琦敏;脑损伤修复治疗又有新希望[N];文汇报;2007年
7 北京市神经外科研究所 北京天坛医院 王忠诚邋院士;神经修复的生力军——神经干细胞[N];健康报;2008年
8 孙国根;神经干细胞并非“全能制造者”[N];中国医药报;2009年
9 孙国根 白毅;灵长类脑内神经干细胞被发现[N];中国医药报;2011年
10 特约记者 风云;我国科学家成功培养出体外神经干细胞[N];北京科技报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郭立云;猕猴胚胎源性神经干细胞诱导、脑内移植及其在青光眼玻璃体内的转归—探索性研究[D];昆明医科大学;2013年
2 任永娟;材料调控神经干细胞的研究[D];清华大学;2009年
3 曹翠丽;大鼠神经干细胞的体外培养及向神经元的诱导分化[D];河北医科大学;2005年
4 周虎田;骨髓源神经干细胞生物学特性的研究[D];第一军医大学;2005年
5 段发亮;神经干细胞培养、增殖、迁移和分化的研究[D];第一军医大学;2005年
6 许汉鹏;中枢神经系统多潜能神经干细胞体外培养模型的建立及其细胞学特性的初步研究和体内移植实验[D];第四军医大学;2000年
7 高剑峰;海马神经干细胞增生分化及影响因素[D];郑州大学;2010年
8 高峰;小鼠神经干细胞免疫原性的研究[D];浙江大学;2010年
9 张殿君;胰岛素样生长因子-1对脊髓源性神经干细胞分化调控的实验研究[D];吉林大学;2009年
10 卢洪流;成年大鼠脑内神经干细胞的在体研究[D];第二军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王轩;细胞外钾离子对体外培养神经干细胞凋亡和分化的影响及其机制的研究[D];第四军医大学;2008年
2 吕艳玲;胚胎大鼠海马神经干细胞的扩增及其与三维微小凹图式复合的研究[D];重庆大学;2010年
3 汪立平;新生大鼠神经干细胞体外培养与诱导分化的研究[D];苏州大学;2004年
4 武孔彦;神经干细胞纹状体内移植后的行为和功能研究[D];华东师范大学;2006年
5 戴明舒;神经干细胞代谢参数的测定及其模型研究[D];大连理工大学;2006年
6 游晓青;神经干细胞体外增殖与分化的部分影响因子探讨[D];福建医科大学;2003年
7 吴蕾;雌激素对大鼠神经干细胞的影响及其作用机制[D];安徽医科大学;2003年
8 高安慧;去甲肾上腺素对胎鼠室下带神经干细胞的作用研究[D];华东师范大学;2004年
9 程卓;氧化应激诱导神经干细胞自噬发生的实验研究[D];吉林大学;2012年
10 樊明超;人胚胎纹状体来源神经干细胞体外培养生物学特性[D];青岛大学;2010年
，本文编号：769338
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/769338.html
