法尼醇对白念珠菌生物膜耐药性的作用及PKC信号通路调空

发布时间：2017-09-02 06:03

  本文关键词：法尼醇对白念珠菌生物膜耐药性的作用及PKC信号通路调空

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【摘要】：研究目的：本研究通过检测法尼醇对白念珠菌生物膜药物易感性、形态、麦角甾醇和葡聚糖含量变化、蛋白激酶C (Protein kinase C, PKC)信号通路相关基因及MKC1蛋白表达的作用，探讨法尼醇作为一种抗微生物化学活性分子对白念珠菌生物膜耐药性的作用及其调控机制。 研究方法：本研究分为白念珠菌法尼醇处理组、法尼醇未处理对照组和耐药组，针对不同时相生物膜（6h、12h、24h、36h）进行研究。研究采用下述方法探讨法尼醇对白念珠菌生物膜耐药相关生物学特点的作用：细胞增殖与活性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8, CCK-8）检测白念珠菌生物膜最低抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration, MIC）、扫描电镜观察生物膜形态、高效液相色谱法测定麦角甾醇含量、酵母β-葡聚糖检测试剂盒测定葡聚糖含量。进而，研究采用反转录PCR (RT-PCR)、实时荧光定量PCR (q-PCR)分析法尼醇对PKC信号通路相关基因Pkc1、Bck1、Mkk2、Mkc1、Swi4、Hsp90表达的调控作用，并采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测法尼醇对MKC1p表达的作用。研究结果：采用氟康唑浓度梯度递增法诱导的白念珠菌耐药株，经KONT真菌显色MIC药敏系统检测，MIC≥64μg/mL，证明耐药株诱导成功。经外源性法尼醇处理后，CCK-8检测发现生物膜在6h、12h、24h时MIC80值降低，而在36h时MIC80值无明显变化；扫描电镜结果显示法尼醇处理组生物膜主要由大量短杆状芽生孢子及少量的假菌丝组成，细胞表面形态发生改变；高效液相色谱法测定法尼醇处理组生物膜麦角甾醇含量降低；葡聚糖含量检测试剂盒测定法尼醇处理组生物膜葡聚糖含量降低。RT-PCR结果显示，在生物膜形成6h，法尼醇处理组Pkc1、Mkk2、Mkc1、Hsp90表达下调，Bck1和Swi4表达无明显改变；在12h，法尼醇处理组Pkc1、Mkk2、Mkc1、Hsp90基因表达下调，Bck1和Swi4表达无明显改变；在24h，法尼醇处理组Pkc1、Mkk2基因表达下调，，其他基因表达无明显改变；在36h，法尼醇处理组Pkc1基因表达下调，其他基因表达无明显改变。q-PCR分析显示，在生物膜形成6h，法尼醇处理组Pkc1、Bck1、Mkk2、Mkc1、Swi4和Hsp90基因表达下调；在12h，法尼醇处理组Pkc1、Mkk2、Mkc1、Swi4和Hsp90基因表达下调；在24h，法尼醇处理组Pkc1和Mkk2基因表达下调，Swi4基因表达上调；在36h，法尼醇处理组基因表达上调。WesternBlot检测发现，在外源性法尼醇作用下，MKC1蛋白表达水平在生物膜6h、12h、24h时下调；在36h，MKC1蛋白表达水平无明显差异。 结论：采用氟康唑浓度梯度递增法成功建立了耐药株模型。法尼醇的调控作用与生物膜形成时相相关：法尼醇可能通过抑制生物膜的形成、降低麦角甾醇及β-1,3葡聚糖的含量、调控PKC信号通路的部分基因和MKC1蛋白影响白念珠菌早期、中期生物膜耐药性，但在成熟后期生物膜耐药性无明显变化。
【关键词】：白念珠菌生物膜 法尼醇（farnesol） 耐药性 蛋白激酶C (Protein kinase C PKC)信号通路
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R379.4;R446.5
【目录】：

• 中英文对照表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 氟康唑体外人工诱导白念珠菌耐药株13-17
• 第二部分 法尼醇对白念珠菌生物膜耐药性的作用17-28
• 第三部分 法尼醇对白念珠菌 PKC 信号通路调控的研究28-37
• 全文小结37-38
• 参考文献38-45
• 文献综述45-56
• 参考文献51-56
• 攻读学位期间发表文章情况56-57
• 致谢57

【参考文献】

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1 孙长贵;曾贤铭;杨燕;;肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验及质量控制介绍[J];江西医学检验;2007年01期

本文编号：776782