毕赤酵母表达HBsAg的分离纯化和鉴定

发布时间：2017-09-02 12:11

  本文关键词：毕赤酵母表达HBsAg的分离纯化和鉴定

  更多相关文章： 毕赤酵母 乙型肝炎表面抗原 分离纯化 鉴定

【摘要】：目的：(1)建立一套以柱层析为主的毕赤酵母表达HBsAg的分离纯化工艺,对HBsAg进行生物学性质鉴定；(2)制备重组毕赤酵母乙型肝炎疫苗,检测重组乙型肝炎疫苗诱导小鼠抗体应答。 方法：(1)毕赤酵母GS115发酵液高速离心收集菌体,加入细胞裂解液乳化高压均质机破碎,破碎液经聚乙二醇沉淀法澄清样品,上清液调整pH值,电导率和自身浓度,DEAE阴离子交换层析,收集合格样品进行苯基疏水层析,超滤浓缩脱盐,收集浓缩液,经过凝胶过滤分子筛层析收集纯化终产品；(2)Western-blot免疫印迹和还原型SDS-PAGE银染法检测HBsAg特异性,扫描电镜观察HBsAg颗粒形态,ELISA法检测HBsAg含量,高效凝胶分子筛液相方法检测HBsAg纯度；(3)AlCl3溶液缓慢恒速流加NaOH溶液制备Al(OH)3佐剂,纯化终产品稀释至一定浓度加入等体积的铝佐剂搅拌混匀,制备终浓度为20μg/ml(?)勺疫苗成品；(4)腹腔注射BALB/c小鼠重组乙型肝炎疫苗,诱导产生anti-HBs,眼内眦静脉采血,ELISA法检测BALB/c小鼠血清中anti-HBs含量,组间数据采用单因素方差分析(ANOVA)进行统计学分析。 结果：(1)Western-blot免疫印迹和SDS-PAGE银染见HBsAg特异性条带,电镜扫描见均一的平均直径为22nm球形颗粒,ELISA法检测HBsAg含量为440μg/ml,高效凝胶分子筛液相检测HBsAg纯度超过95.0%;(2)Al(OH)3佐剂高压灭菌后均一稳定,未出现沉淀现象,自制疫苗吸附率为99.995%,达到欧洲药典标准,(3)动物实验表明自制疫苗诱导小鼠产生的anti-HBs在第7周达到峰值163±7.384U/L,与阳性对照组有显著性差异(P0.05)。 结论：(1)成功建立了一套以柱层析为主的毕赤酵母表达的HBsAg分离纯化工艺,纯化终产品生物学性质符合欧洲药典标准；(2)自制乙型肝炎疫苗可诱导小鼠产生高浓度的anti-HBs,其研发工艺具有进一步生产开发前景。
【关键词】：毕赤酵母 乙型肝炎表面抗原 分离纯化 鉴定
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392.11
【目录】：

• 英文缩略词表3-5
• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料与方法10-21
• 结果21-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述：基因工程HBsAg纯化技术研究进展38-48
• 参考文献44-48
• 致谢48-49
• 作者简介49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张焱;闭静秀;周卫斌;李岩;董爱华;孙娟;苏志国;;PEG沉淀结合层析分离重组乙肝病毒表面抗原[J];过程工程学报;2006年01期

2 苏志国;;高压匀浆破碎法提取酵母胞内蛋白质[J];生物工程学报;1990年03期

3 闭静秀,周卫斌,李岩,黄永东,张焱,董爱华,苏志国;聚乙二醇伴随式离子交换层析分离重组乙肝病毒表面抗原[J];生物工程学报;2005年06期

4 原航;李岩;黄永东;罗坚;马光辉;苏志国;;溶剂环境对乙肝表面抗原(HBsAg)结构的影响[J];生物工程学报;2010年12期

5 梁存军;王健;黎晓敏;吕凤林;张一;陈军;;高压高温灭菌前后纳米氢氧化铝佐剂理化性质的对比研究[J];中国生物工程杂志;2007年05期

6 陈万革,金立杰,阎昆明,李德娟,赵睿,杨屹;Matrex Cellufine Sulfate在重组HBs Ag纯化中的应用[J];生物技术;2002年04期

7 董雪林,杨屹,周长军,赵小敏,王佳凤,李德娟,魏自力;重组HBsAg大规模生产中超速离心纯化工艺的改进[J];中国生物制品学杂志;2003年06期

8 李建平;杨屹;王宇;李德娟;陈万革;;纯化乙型肝炎病毒表面抗原新层析工艺的建立[J];中国生物制品学杂志;2006年06期

9 叶琳,刘敦员,赵田,梁雯,邹建国,张磊,曾秀明,苏林;两种配方的氢氧化铝吸附基因工程乙肝疫苗的效果比较[J];微生物学免疫学进展;1999年04期

10 姚伟;段丽娟;张岩锐;张英;任雅平;崔铁民;;离子交换膜层析纯化重组HBsAg的研究[J];中国医药生物技术;2007年05期

，

本文编号：778461