蓝氏贾第鞭毛虫PPDK多肽抗体制备与定位研究

发布时间：2017-09-03 05:09

  本文关键词：蓝氏贾第鞭毛虫PPDK多肽抗体制备与定位研究

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【摘要】：目的制备蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)磷酸烯醇式丙酮酸双激酶(PPDK)特异性多肽抗体并进行PPDK定位。方法采用DNAstar软件和BIOSUN生物医学软件,结合抗原表位分析的基本原理,对贾第虫PPDK的氨基酸序列进行抗原分析,最终确定贾第虫PPDK的优势抗原表位肽。将上述抗原表位肽与KLH进行偶联,获得3个偶联蛋白,经脱盐柱吸附、洗脱纯化后,对抗原表位肽-KLH偶联蛋白进行定量测定。将得到的3条多肽-KLH偶联物混合,用PBS稀释为1mg/ml,分别与第1、15、29和43d免疫4只新西兰白兔[于颈背部皮下多点(至少8点)注射多肽抗原2mg],获得抗PPDK抗血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot试验检测抗体的滴度和特异性。以R3为一抗,以DyLight 649抗兔IgG为二抗,采用免疫荧光法进行PPDK的细胞定位。结果根据PPDK抗原分析结果,最终确定PPDK的优势抗原表位3个,即p1:TPENQPANSELC(氨基酸位点12-23),p2:KTRYGRKTDPELC(氨基酸位点167-178)和p3:DLQKKLAEDMNKKHC(氨基酸位点641-654)。与KLH偶联获得3个多肽偶联蛋白,即P1、P2和P3。3个偶联蛋白联合免疫新西兰白兔获得4份抗PPDK抗血清,纯化后的抗体分别命名为R1、R2、R3和R4。Western blot检测显示,R3和R4可与PPDK特异性结合,无交叉反应。以R3为一抗进行免疫荧光试验,结果显示PPDK主要定位于贾第虫细胞的胞浆内。结论本研究获得2个可与贾第虫PPDK特异性结合的抗体,并初步判断PPDK主要分布于贾第虫细胞胞浆,为PPDK功能研究奠定了基础。
【作者单位】： 吉林医药学院病原学教研室;首都医科大学病寄生虫学教研室;
【关键词】： 蓝氏贾第鞭毛虫 磷酸烯醇式丙酮酸双激酶 多肽抗体
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81301450) 吉林省科技厅国际合作项目(No.20130413035GH) 吉林省教育厅项目(No.2014367)
【分类号】：R392
【正文快照】： ***蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)简称贾第虫,是引起腹泻的主要病原体之一[1-3],贾第虫是一种重要的模式生物,其进化地位原始,不具备线粒体和高尔基体等典型细胞器,能量代谢缺乏三羧酸循环(tricar-boxylic acid cycle reactions)和氧化磷酸化(oxidativephosphorylation)途

【参考文献】

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【共引文献】

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7 吴宇凡;王e

本文编号：783017