心之病络孙络绌急的中医微观病理特征研究

发布时间：2017-09-03 09:21

  本文关键词：心之病络孙络绌急的中医微观病理特征研究

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【摘要】：目的建立心之病络孙络绌急的大鼠模型，并通过研究不同观察时间点内大鼠整体、器官、组织、细胞以及分子水平的病理变化，以阐明“孙络-微血管”病变之孙络绌急的病理演变规律，为脉络病变的临床微观辨证用药提供理论依据。方法（1）选取雄性SD大鼠30只，随机分为空白组，造模5min组、造模10min组、造模20min组以及造模30min组，每组6只。通过股静脉注射pit的方法建立心之病络孙络绌急的病理模型。采用激光多普勒技术检测造模前后心肌表面血流量变化，随后取心肌组织行分别Naga-Olsen染色、电镜观察各组大鼠心肌组织病理变化，并检测各组心肌组织claudin-5、occludin蛋白表达。另取雄性SD大鼠6只，检测造模前后心肌微血管通透性变化。（2）选取雄性SD大鼠30只，随机分为空白组，造模5min组、造模10min组、造模20min组以及造模30min组，每组6只。造模后检测血浆ET-1、NO、AngⅡ、TXB2以及6-Keto-PGF1α浓度，并检测各组心肌组织iNOS、eNOS、ET-1mRNA表达。（3）选取雄性SD大鼠30只，随机分为空白组，造模5min组、造模10min组、造模20min组以及造模30min组每组6只，造模后采用TUNEL方法检测各组大鼠心肌细胞凋亡指数，并检测各组微血管新生、凋亡相关蛋白表达。 结果 1、与空白组比较，模型组大鼠心脏表面血流量在各时间点均有不同程度的减少（P0.05或P0.01），并且随着时间的推移，血流量呈现出逐渐恢复的趋势。Nagar-Olsen染色显示，造模后10min开始心肌组织可见大片红染的阳性反应区。缺血表现尤以模型10min组和模型20min组最为明显。电镜观察显示各模型组微血管内皮细胞间紧密连接清晰致密，微血管内皮细胞核不规则，染色质不均匀、边集，，呈现明显凋亡现象。模型各组吞饮小泡数量明显增加。造模后10min开始微血管通透性开始增加并持续至观察时间结束。 2、与空白组比较，各模型组血浆ET-1水平均显著升高（P0.01），且于5min时达到高峰。血浆TXB2在造模5min组显著升高（P0.01），而在30min组时其水平明显下降（P0.05）。血浆6-keto-PGF1α水平在造模10min后开始显著下降（P0.05或P0.01），并在30min时达到低峰（P0.01）。TXB2/6-keto-PGF1α在造模后5min至20min显著增高（P0.01或P0.05），并于5min时达到高峰，而在30min时恢复至正常水平。AngⅡ水平在造模后5min内并无显著变化，而在造模后10min开始其水平显著升高（P0.05），并呈递增趋势，于30min时达到高峰（P0.01）。各模型下血清NO浓度表现为不同程度的升高。基因表达方面，iNOS mRNA表达在造模后5min组、10min组显著上调（P0.01），而在造模后30min组时其表达显著下调（P0.01），而eNOSmRNA在各时间点表达均明显下降（P0.05），ET-1mRNA在各组均有不同程度的升高。 3、空白组大鼠未见明显阳性凋亡细胞，各模型组凋亡细胞数量明显增加（P0.05），并且随缺血时间延长，凋亡细胞数量逐渐升高。与空白组比较，Bax蛋白表达在造模后20min开始明显升高（p0.01）。各模型组bcl-2蛋白表达无明显变化。p53方面，与空白组比较，模型组大鼠在前20min内无明显变化，而在30min时显著增强（p0.05）。与空白组比较，各模型组CD34、VEGF、PDGF、Ang2蛋白表达均未有明显变化（p0.05）。 结论 1.孙络绌急病变急性期，心肌表面血流量即可明显减少。 2.孙络绌急病变急性期，心肌表面微血管通透性显著升高，微血管内皮细胞紧密连接结构完整，紧密连接蛋白表达未见明显升高，吞饮小泡数量显著增加，提示孙络绌急急性期微血管内皮细胞可能通过吞饮小泡的大量释放来使其通透性发生改变。 3.孙络绌急病变急性期微血管内皮细胞正常调节分泌功能紊乱，微血管舒缩因子TXA2、PGI2、ET-1、NO异常分泌、基因异常表达，动态平衡遭到破坏。孙络绌急发生后RAS系统可被激活并在进一步心肌损伤过程中逐渐发挥重要作用。多种舒缩因子动态变化也提示多种复杂机制相互作用共同参与诱导着孙络绌急发生发展过程。 4.孙络绌急病理条件下，机体可能通过调节局部细胞凋亡相关因子的表达启动凋亡程序，促进细胞凋亡。 5.孙络绌急急性期观察时间内未发现明显微血管新生现象。
【关键词】：心脏 络病 孙络绌急 微血管痉挛 病理特征
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332;R259
【目录】：

• 英文缩略词表6-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 第一部分 心之病络孙络绌急模型大鼠心肌表面血流量及通透性变化研究15-26
• 1 材料与方法15-18
• 1.1 动物15
• 1.2 试剂与仪器15-16
• 1.3 动物分组与造模16
• 1.4 标本采集与指标检测16-18
• 1.5 统计学处理18
• 2 结果18-22
• 2.1 心脏表面血流量变化18-19
• 2.2 心肌表面微血管通透性检测19-20
• 2.3 Naga-Olsen 染色结果20-21
• 2.4 电镜结果21-22
• 2.5 claudin-5 和 occludin 蛋白表达22
• 3 讨论22-26
• 3.1 孙络绌急模型的建立22-23
• 3.2 心肌表面血流量变化23-24
• 3.3 心肌表面微血管通透性变化24-26
• 第二部分 心之病络孙络绌急模型大鼠微血管舒缩因子变化研究26-40
• 1 材料与方法26-32
• 1.1 动物26
• 1.2 试剂与仪器26-27
• 1.3 动物分组与造模27
• 1.4 标本采集与指标检测27-32
• 2 结果32-37
• 2.1 血浆 TXB2、6-Keto-PGF1α、AngⅡ浓度变化32-34
• 2.2 血浆 NO、ET-1 浓度变化34-35
• 2.3 心肌组织 iNOS、eNOS、ET-1 mRNA 表达35-37
• 3 讨论37-40
• 第三部分 心之病络孙络绌急模型大鼠心肌微血管新生与凋亡相关蛋白变化研究40-51
• 1 材料与方法40-43
• 1.1 动物40
• 1.2 试剂与仪器40-41
• 1.3 动物分组与造模41
• 1.4 标本采集与指标检测41-43
• 2 结果43-48
• 2.1 TUNEL 法检测心肌细胞凋亡指数43-44
• 2.2 微血管凋亡蛋白 Bax、Bcl-2、p53 表达44-47
• 2.3 微血管新生蛋白 CD34、VEGF、PDGF、Ang2 表达47-48
• 3 讨论48-51
• 3.1 孙络绌急病理状态下的细胞凋亡48-49
• 3.2 孙络绌急病理状态下的微血管新生49-51
• 总结论51-52
• 参考文献52-56
• 文献综述56-65
• 参考文献61-65
• 攻读硕士学位期间发表论文情况65-66
• 致谢66-67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：784165