抑癌蛋白UBIAD1在高尔基体定位信号的研究

发布时间：2017-09-03 16:34

  本文关键词：抑癌蛋白UBIAD1在高尔基体定位信号的研究

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【摘要】：UBIAD1蛋白与由脂代谢异常引起的施耐德角膜营养不良SCD（Schnyder’scorneal dystrophy），帕金森神经疾病，多种人体癌症以及维他命K合成有关。UBIAD1在细胞中的亚定位目前在国际上尚无定论。由于UBIAD1蛋白可作为人体膀胱癌的抑癌因子，我们研究了其在人胚肾细胞HEK293及人体膀胱癌细胞系J82和T24的亚细胞的定位。 利用生物化学与细胞生物学的方法，我们将全长UBIAD1基因、UBIAD1基因的片段、基因定点突变的UBIAD1与编码绿色荧光蛋白的质粒pEGFP-N1相连，转染HEK293细胞，通过观察绿色荧光蛋白的位置来确定其在细胞内的定位和转运，，体外过量表达结果与通过免疫组化得到的结果一致。我们首次观察了UBIAD1定位在高尔基体上。通过观察UBIAD1蛋白片段的亚细胞定位我们发现其N-端对其在高尔基体上的定位有重要影响，而且将UBIAD1的N-端与仅定位于细胞膜上的蛋白（orail1）相连后，可使orail1定位于高尔基体上。 生物信息学分析结果显示UBIAD1的N-端54-57位的氨基酸序列RPWS作为高尔基体定位信号影响其在高尔基体上滞留。我们这一预测结论通过定点突变实验得以印证，发现RPWS信号可以作为UBIAD1蛋白在高尔基体的滞留信号。RPWS在UBIAD1的N端可以形成一个精氨酸指（Arginine finger）结构来帮助UBIAD1蛋白定位在高尔基体上。 用BrefeldinA处理HEK293细胞后发现UBIAD1蛋白在高尔基体上的定位受到破坏，因此UBIAD1很可能是通过COPII小泡从内质网转运至高尔基体上。 为检测RPWS突变是否影响UBIAD1的抑癌活性，将UBIAD1（RPWS突变）转染T24细胞系，经过流式细胞仪检测，与正常的UBIAD1蛋白相比，突变型UBIAD1导致的细胞后期凋亡率下降，表明UBIAD1在高尔基体上的定位影响其正常功能。
【关键词】：UBIAD1 亚细胞定位 Golgi滞留信号 胞内转运 抑癌因子
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目录7-9
• 1 绪论9-23
• 1.1 UBIAD1 研究进展9-12
• 1.2 蛋白质在高尔基体滞留机制12-16
• 1.3 细胞内蛋白质的分选以及膜泡运输16-17
• 1.4 COPII 小泡的形成以及蛋白分选机制17-22
• 1.5 本论文的研究目的、意义及内容22-23
• 2 材料和方法23-34
• 2.1 实验材料23-26
• 2.2 实验方法26-34
• 3 实验结果34-52
• 3.1 UBIAD1 蛋白以及 UBIAD1 亚克隆片段的亚细胞定位研究34-39
• 3.2 UBIAD1 蛋白 N-端影响蛋白定位的特定氨基酸的确定39-43
• 3.3 UBIAD1 蛋白在细胞内从 ER 到 Golgi 的转运43-45
• 3.4 UBIAD1 从内质网到高尔基体的顺向运输可能依赖于 COPII 介导的转运机制45-48
• 3.5 UBIAD1 在高尔基体上的定位一定程度上影响其肿瘤抑制活性48-52
• 4 讨论52-54
• 5 总结与展望54-55
• 致谢55-56
• 参考文献56-65
• 附录1 攻读学位期间发表的论文65-66
• 附录2 攻读学位期间的会议论文66-67
• 附录3 英文缩写词表67

【共引文献】

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本文编号：786141