慢病毒介导的稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基基因的WRL68细胞株构建

发布时间：2017-09-03 23:33

  本文关键词：慢病毒介导的稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基基因的WRL68细胞株构建

  更多相关文章： 慢病毒载体 GCLC 过表达 WRL细胞

【摘要】：目的利用慢病毒载体构建稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的WRL68细胞株。方法采用PCR方法合成GCLC基因全长,经Not I、Nsi I酶切后克隆到慢病毒载体LV6上;采用PCR、酶切、测序鉴定重组质粒LV6-GCLC;将重组质粒转染293T细胞,收集培养上清并感染WRL68细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株。采用增强型绿色荧光蛋白检测转染情况,采用Real-time PCR及Western blotting鉴定所构建的细胞株;MTT法检测细胞活性;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞谷胱甘肽(GSH)含量。结果 PCR、酶切及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光及蛋白表达,包装过表达慢病毒并检测其浓缩滴度为1.0×109 TU/ml;用1μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳定过表达细胞株;GCLC过表达组中GCLC的m RNA和蛋白的表达量高于空载体转染组及对照组(P0.05);GCLC过表达组、空载体转染组及对照组的细胞活性间比较,差异无统计学意义(P0.05);GCLC过表达组GSH含量明显高于空载体转染组及对照组(P0.05)。结论成功构建了稳定过表达人GCLC的WRL68细胞株。
【作者单位】： 广西医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室;
【关键词】： 慢病毒载体 GCLC 过表达 WRL细胞
【基金】：国家自然科学基金(81360420) 广西自然科学基金(2015GXN SFAA139120;2012GXNSFAA053155)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 谷胱甘肽(GSH)作为细胞内一种重要的调节代谢剂和抗氧化剂,具有清除氧自由基、增强抗氧化物酶活性、提高机体抗氧化防御能力等作用,成为多种疾病治疗和辅助治疗的药物,目前已广泛应用于临床[1]。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteinesynthethase,γ-GCS)是体内合成GSH

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王淑艳;张愚;;慢病毒载体的设计及应用进展[J];中国生物工程杂志;2006年11期

2 黄芳;王毅刚;蔡荣;杨光华;钱程;;可诱导慢病毒载体的优化策略及应用[J];细胞生物学杂志;2007年06期

3 毛颖佳;郑源强;石艳春;;慢病毒载体及其应用的研究进展[J];中国生物制品学杂志;2009年02期

4 张薇;赵志英;张坤;;慢病毒载体及应用研究进展[J];包头医学院学报;2011年05期

5 何佳平;方_g聃;张帆;孙凤强;王娟;张敬之;;慢病毒载体转录通读率检测方法的建立[J];生物工程学报;2013年07期

6 徐晓明;杨慧;王晓萍;;慢病毒载体的构建及优化[J];中国临床康复;2006年09期

7 张雅丽;程通;蔡毅君;张涛;魏丽华;杨炳春;郑舟;张军;夏宁邵;;重组慢病毒对不同哺乳动物细胞基因转移及表达效率的研究[J];厦门大学学报(自然科学版);2008年03期

8 王晓通;李雷;钱倩;谢玉波;肖强;;转录因子E2F-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定[J];广西医科大学学报;2010年02期

9 曹金芳;李伟宏;邓辉;王惠宁;;核心结合因子α1过表达慢病毒载体的构建及鉴定[J];中国现代医生;2010年33期

10 何佳平;张敬之;;慢病毒载体转录“通读”改进研究进展[J];生物工程学报;2011年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 冯东福;毕永延;陈二涛;王永志;楚胜华;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒载体的构建及神经干细胞转染[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

2 李振宇;徐开林;潘秀英;陈香梅;鹿群先;主鸿鹄;李慧;陈海英;何徐彭;;慢病毒载体的构建及其包装细胞系的建立[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

3 王海彬;;雌激素相关受体α基因超表达慢病毒载体的构建[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

4 张晓宇;秦宜德;王超;张文晓;王巍;何晓光;;牛乳铁蛋白肽基因的慢病毒载体构建[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2010年学术交流会论文集[C];2010年

5 李振宇;徐开林;潘秀英;鹿群先;;慢病毒载体的构建、改造及其包装细胞系的建立[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年

6 王玉兰;任振华;;感染食蟹猴骨髓间充质干细胞的病毒载体研究[A];第十三次全国临床药理学学术大会论文汇编[C];2012年

7 黄新凤;叶金波;蒋英芝;任晓虎;黄培武;刘建军;;SET shRNA慢病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定[A];中国科协第十四届年会第十七分会场环境危害与健康防护研讨会论文集[C];2012年

8 杨龙江;侯健;;构建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒载体[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

9 李振宇;徐开林;潘秀英;鹿群先;孙海英;主鸿鹄;陈香梅;何徐彭;;慢病毒载体的构建、改造及其包装细胞系的建立[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年

10 刘峰;肖兴鹏;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的构建与鉴定[A];2011年全国医药学术论坛交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班论文集[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 杨玉芳;用LMP1构建重组慢病毒载体及建立转基因小鼠模型[D];第一军医大学;2004年

2 徐世永;慢病毒载体法高效转基因鸡制备技术研究[D];南京农业大学;2007年

3 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒载体的构建及其功能的相关性研究[D];郑州大学;2011年

4 吴福国;表达Cdc42-shRNA重组慢病毒载体的构建及其对膀胱癌细胞影响的实验研究[D];兰州大学;2007年

5 马强;肿瘤翻译调控蛋白（TCTP）对结肠癌细胞LoVo的生物学特性影响及安全型慢病毒载体构建探索[D];南方医科大学;2009年

6 郝又国;携带Rab9 cDNA的慢病毒对C型Niemann-Pick病小鼠的神经保护作用[D];华中科技大学;2009年

7 杨欢;慢病毒介导中国人产甲酸草酸杆菌中草酸分解基因FRC和OXC转染肝干细胞的实验研究[D];华中科技大学;2011年

8 张文卿;HCMV pp150表达及E1-pp65慢病毒载体刺激T细胞免疫应答的研究[D];山东大学;2006年

9 林元邦;改进型复制缺陷性腺病毒（HDAd）转基因载体特异性及稳定性研究[D];天津医科大学;2012年

10 梁俊;体外研究慢病毒载体介导人DNMT1基因对SLE患者CD4~+T淋巴细胞的作用[D];复旦大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 熊冬兰;白细胞介素-18基因慢病毒表达载体抗肺癌作用的研究[D];福建医科大学;2015年

2 许媛;TWEAK慢病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达与功能初步研究[D];川北医学院;2015年

3 邓乃刚;p.93K-T QDPR基因慢病毒过表达载体的构建[D];河北联合大学;2014年

4 徐小隔;Let-7d慢病毒载体对体外骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响[D];郑州大学;2015年

5 魏寇准;肝素酶过表达慢病毒载体的构建及鉴定[D];皖南医学院;2014年

6 苏一鸣;构建过表达神经生长因子β亚基基因的慢病毒载体的实验研究[D];福建医科大学;2010年

7 高强;慢病毒载体包装细胞系的建立[D];沈阳药科大学;2006年

8 李雄;rPNCE-Lenti1259慢病毒载体的构建及转染人类胚胎干细胞[D];中南大学;2009年

9 刘凤斌;慢病毒介导TFAM/POLG基因knock-down小鼠的建立[D];辽宁医学院;2011年

10 刘景伟;以GFP为报告基因的多基因共表达慢病毒载体系统的构建[D];郑州大学;2009年

，

本文编号：788038