肠道病毒71型微复制子的构建

发布时间：2017-09-04 20:13

  本文关键词：肠道病毒71型微复制子的构建

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【摘要】：目的构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系,研究微复制子的复制及表达情况。方法聚合酶链式反应扩增绿色荧光蛋白(EGFP),利用特定酶切位点及连接酶,将目的基因片段连接至p MD19-T载体,分别构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系。荧光显微镜下观察微复制子表达情况,实时荧光定量PCR观察微复制子复制情况。结果 EV71非结构蛋白微复制子及EV71 3C蛋白酶微复制子表达后,均可观察到特异性绿色荧光,荧光强度有明显差异;转染后12~72 h取样所测RNA含量几乎不变。结论非结构蛋白全长及3C蛋白酶启动微复制子转录强度不同,所构建微复制子不具备复制功能,提示结构蛋白编码区对病毒RNA复制有重要意义。
【作者单位】： 山东大学公共卫生学院病毒学实验室;
【关键词】： 肠道病毒型 微复制子 报告基因 非结构蛋白
【基金】：国家自然科学基金(81371833) 山东省医药卫生科技发展计划(2013WS0211)
【分类号】：R373
【正文快照】： 肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)从属于小RNA病毒科肠道病毒A属(Human enterovirus A),能引起婴幼儿手足口病[1]。病毒核酸是单股正链RNA,仅含一个开放阅读框(open reading frame,ORF),ORF的上游及下游是5'非编码区(5'UTR)及3'非编码区(3'UTR)[2-3]。ORF编码具有2 193个氨

【共引文献】

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