骨髓源性侧群细胞的体外增殖及其向肝样细胞分化的实验研究
发布时间：2017-10-08 07:21
本文关键词：骨髓源性侧群细胞的体外增殖及其向肝样细胞分化的实验研究
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【摘要】：目的 1．通过观察BMSP在体外培养条件下能否保持侧群细胞的特性，以探讨BMSP在体外扩增的可能性。 2．观察在HGF定向诱导下大鼠BMSP转分化的情况，初步探讨HGF在大鼠BMSP转分化为肝样细胞中发挥的作用及机制。 方法 1．从大鼠的股骨和胫腓骨分离骨髓细胞并制备骨髓细胞悬液，通过流式细胞仪分选获取BMSP；用低糖DMEM㧏10％胎牛血清培养基培养BMSP。采用RT-PCR检测细胞中ABCG-2基因表达水平。 2．在体外向BMSP中加入不同浓度的HGF诱导其向肝样细胞分化，并分别于第3、7、14、21天，通过RT-PCR、免疫印迹法等技术检测AFP、ALB等细胞表面标志物的表达情况。 结果 1．每只SD大鼠的双侧股骨和胫腓骨所制备的骨髓细胞悬液的细胞总数约2-10×108个，经分选可获得5-10×105个BMSP。 2．BMSP在体外培养6小时后开始贴壁生长，细胞形态以长梭形为主。随着培养时间的延长,细胞生长曲线显示第7天细胞数量最多，以后进入平台期。第7天细胞按1:2传代培养，传代后细胞于24小时内完全贴壁，细胞传至第10代时，细胞增殖能力仍然很强。 3．诱导分化实验表明：一定浓度的HGF具有明显的促进BMSP转分化为肝样细胞。RT-PCR检测显示：培养第3天的BMSP空白组及因子组未见AFP、ALB mRNA表达；AFP mRNA在第7天的因子组表达、ALB mRNA在因子组则不表达，空白组AFP、ALB mRNA均未表达；AFP mRNA在第14天的因子组表达减弱、ALB mRNA在第14天的因子组表达，空白组AFP、ALB mRNA均未表达；第21天因子组见AFP mRNA不表达、ALB mRNA表达减弱，空白组AFP、ALB mRNA均未表达。因子组与对照组相比有显著性差异，P0.05，有统计学意义。 结论 1．通过流式细胞仪分选获得BMSP在一定时间内可以在体外扩增并保持干细胞的特性，，且传代的BMSP仍具有很强的自我更新和增殖能力。 2．扩增的BMSP在HGF的诱导下可以逐渐向肝样细胞分化。
【关键词】：骨髓源性侧群细胞 干细胞 流式细胞分选术 肝细胞生长因子
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：
- 中英文缩略词表4-5
- 中文摘要5-7
- Abstract7-9
- 前言9-13
- 第一部分 骨髓源性侧群细胞的分选、体外增殖培养及鉴定13-29
- 前言13
- 1．材料与方法13-21
- 2．结果21-26
- 3．讨论26-29
- 第二部分 骨髓源性侧群细胞向肝样细胞的定向诱导分化29-46
- 前言29
- 1．材料与方法29-36
- 2．结果36-43
- 3．讨论43-46
- 结论46-47
- 参考文献47-51
- 综述51-65
- 参考文献60-65
- 致谢65-66
- 作者简介66
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
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本文编号：992709
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