槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷对高糖引起内皮细胞损伤保护作用的对比研究

发布时间：2017-10-11 10:46

  本文关键词：槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷对高糖引起内皮细胞损伤保护作用的对比研究

  更多相关文章： 槲皮素 1-5-O-槲皮素糖苷 内皮细胞 高糖损伤氧化应激

【摘要】：目的:1、构建内皮细胞高糖损伤模型并检测氧化应激的相关指标。2、探索槲皮素(Quercetin,Qu)和1-5-O-槲皮素糖苷(1-5-O-Quercetin Glycoside,1-5-O-QG)能否通过降低氧化应激水平来减轻高糖引起内皮细胞损伤的程度并比较两者的差异。方法:体外培养人血管内皮细胞,选取生长状态良好的对数期细胞入组。实验分4组:①低糖对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L+24.5mmol/L甘露醇);②高糖损伤组(葡萄糖浓度为30mmo1/L);③高糖+Qu组(30mmol/L葡萄糖+50μmol/LQu);④高糖+1-5-O-QG组(30mmol/L葡萄糖+50μmol/L1-5-O-QG);在高糖处理前2h加入药物,培养48小时后对各组进行以下方面检测:CCK-8检测各组血管内皮细胞活力,测定血管内皮细胞的乳酸脱氢酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平,DCF-DA法检测各组细胞ROS水平,qRT-PCR测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)mRNA、SODmRNA及CATm RNA的水平。结果:(1)血管内皮细胞活力高糖组细胞活力明显低于低糖对照组,有统计学差异(P0.05)。Qu干预组及1-5-O-QG干预组细胞活力均较高糖组升高,且均有统计学意义(P0.05),但两组细胞活力差异对比无统计学意义(P0.05)。(2)LDH活性与低糖组比较,高糖组的细胞LDH活性高(P0.05),Qu组及1-5-O-QG组的细胞LDH活性均较高糖组下降,且均有统计学意义(P0.05),但两组细胞LDH活性差异对比无统计学意义(P0.05)。说明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖导致的LDH活性增高,且两者作用程度无差异。(3)SOD活性与低糖组比较,高糖组的细胞SOD的活性低(P0.05),Qu组及1-5-O-QG组细胞的sod的活性均较高糖组升高,且均有统计学意义(p0.05),但两组细胞sod活性差异对比无统计学意义(p0.05)。说明qu及1-5-o-qg均能缓和高糖导致的sod活性下降,且两者作用程度无差异。(4)gsh-px活性与低糖组比较,高糖组细胞的谷胱甘肽过氧化物酶活性低(p0.05),qu组及1-5-o-qg组细胞的谷胱甘肽过氧化物酶活性均较高糖组升高(p0.05),但两组细胞gsh-px活性差异对比无统计学意义(p0.05)。说明qu及1-5-o-qg均能缓和高糖导致的谷胱甘肽过氧化物酶活性的降低,且两者作用程度无明显差异。(5)mda的生成水平与低糖组比较,高糖组细胞的mda的生成水平高(p0.05),qu组及1-5-o-qg组细胞mda的生成水平均较高糖组下降,且均有统计学意义(p0.05),但两组细胞mda生成水平差异对比无统计学意义(p0.05)。说明qu及1-5-o-qg均能降低高糖导致的mda生成水平升高,但两者作用程度无明显差异。(6)dcf-da法检测各组细胞内活性氧水平结果:与低糖组比较,高糖组细胞的活性氧水平增高(p0.05),qu组及1-5-o-qg组细胞的活性氧水平均较高糖组降低(p0.05),但两组细胞内活性氧水平差异对比无统计学意义(p0.05)。说明qu及1-5-o-qg均能缓和高糖导致的活性氧水平升高,且两者作用程度无明显差异。(7)sodmrna的水平与低糖组比较,高糖组的细胞sodmrna的水平下调(p0.05),qu组及1-5-o-qg组细胞sodmrna的水平均比高糖组上调(p0.05),但两者sodmrna的表达量无明显差异(p0.05)。qu及qg均能降低高糖导致的细胞sodmrna水平下调且两者作用无明显差异。(8)catmrna的水平与低糖组比较,高糖组的细胞catmrna的水平下调(p0.05),qu组及1-5-o-qg组细胞catmrna的水平比高糖组上调(p0.05),但两者catmrna的水平无明显差异(p0.05)。qu及1-5-o-qg均能缓和高糖导致的细胞catmrna水平的下调且两者作用无明显差异。(9)nox4mrna的水平与低糖组比较,高糖组的细胞NOX4mRNA的水平上调(P0.05),Qu组及1-5-O-QG组细胞NOX4mRNA的水平均较高糖组下调(P0.05),但两者NOX4mRNA的水平无明显差异(P0.05)。说明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖导致的细胞NOX4mRNA水平的上调且两者作用无明显差异。结论:①槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷均能通过调节细胞内氧化-抗氧化系统的平衡起到保护高糖引起内皮细胞损伤的作用。②Qu及1-5-O-QG的抗氧化清除氧自由基的能力无明显差异。
【关键词】：槲皮素 1-5-O-槲皮素糖苷 内皮细胞 高糖损伤氧化应激
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 实验材料和方法14-23
• 2.1 实验材料14-15
• 2.1.1 实验所用细胞14
• 2.1.2 主要试剂和药品14-15
• 2.1.3 实验主要仪器15
• 2.2 试验方法15-22
• 2.2.1 器材的灭菌、去RNA酶处理15
• 2.2.2 相关液体的配制15-16
• 2.2.3 血管内皮细胞株(EC-304血管内皮细胞)的的体外培养16-17
• 2.2.4 实验分组17-18
• 2.2.5 CCK-8 检测细胞活力18
• 2.2.6 LDH试剂盒测定细胞的LDH活性18
• 2.2.7 SOD试剂盒测定细胞的总SOD活性18-19
• 2.2.8 GSH-Px试剂盒测定细胞的GSH-PX活性19
• 2.2.9 MDA试剂盒测定细胞的MDA水平19
• 2.2.10 DCF-DA法检测各组细胞内活性氧水平19
• 2.2.11 qRT-PCR检测各组血管内皮NOX4、SOD、CAT等mRNA的水平19-22
• 2.3 统计学方法22-23
• 第3章 结果23-34
• 3.1 血管内皮细胞（EC304）生长特点23
• 3.2 CCK-8 检测细胞活力23-24
• 3.3 细胞LDH活性检测24-25
• 3.4 细胞SOD活性检测25-26
• 3.5 细胞GSH-Px活性检测26-27
• 3.6 细胞MDA水平27-28
• 3.7 DCF-DA法检测细胞内ROS水平检测28-29
• 3.8 qRT-PCR检测相关基因的转录水平29-34
• 3.8.1 SODmRNA水平29-31
• 3.8.2 CATmRNA水平31-32
• 3.8.3 NOX4mRNA水平32-34
• 第4章 讨论34-38
• 第5章 结论38-39
• 5.1 结论38
• 5.2 不足与展望38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-44
• 综述44-48
• 参考文献47-48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邢影;孙继泽;牟凤辉;李文丽;刘银燕;杨锦竹;;槲皮苷对实验性高脂血症大鼠血脂代谢的影响[J];特产研究;2014年02期

2 陈振宇;汤礼军;;多元醇通路与氧化应激在糖尿病慢性并发症中的关系[J];西南军医;2014年03期

3 张家瑞;;槲皮苷和山奈酚对糖尿病小鼠血糖及血脂水平的影响[J];现代食品科技;2013年03期

4 胥光热;彭永权;林静;刘应才;;槲皮素对人内皮祖细胞增殖和凋亡的影响及机制研究[J];中国现代医学杂志;2012年10期

5 钟建青;李波;贾琦;李医明;朱维良;陈凯先;;天然黄酮类化合物及其衍生物的构效关系研究进展[J];药学学报;2011年06期

6 刘倩;叶菲;;己糖胺通路与能量调节[J];中国糖尿病杂志;2010年03期

7 肇莹;张蕾;李会;崔薇薇;任志莹;;槲皮素抗氧化作用的研究进展[J];杂粮作物;2009年02期

8 李钦;郑晓亮;陈爱君;张信岳;;槲皮苷防治溃疡性结肠炎的药效学研究[J];中国现代应用药学;2009年03期

9 李沛波;王永刚;吴钉红;吴忠;苏薇薇;;田基黄中三个黄酮类化合物保肝退黄作用的实验研究[J];中山大学学报(医学科学版);2007年01期

10 李国,张红锋,李义良,王耀发;槲皮素对高糖损伤血管内皮细胞的保护作用[J];中药材;2002年04期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 黄宝康;桂璇;王国伟;;莽草化学成分及资源开发利用研究[A];中国医药教育论坛-中国医药教育协会第三届三次理事大会暨学术年会论文专辑[C];2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 刘珊珊;槲皮苷和熊果酸对睡眠内源性物质影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2008年

，

本文编号：1012093