VE-cadherin对血管稳态的作用及调控机制

发布时间：2017-10-15 02:36

  本文关键词：VE-cadherin对血管稳态的作用及调控机制

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【摘要】：血管内皮细胞钙粘连蛋白(VE-cadherin)是血管内皮细胞(EC)之间粘着连接(adherens junctions)的关键分子,其结构和功能异常会导致EC粘着连接解离。近年研究表明,VE-cadherin细胞内结构域虽然不直接参与EC之间的粘着连接,但它对VE-cadherin在细胞膜的稳定分布和EC粘着连接的功能至关紧要。EC位于血管壁内层,直接与各种血液细胞和病理因子接触,多种病理因子可作用于EC,引起EC异常激活和损伤,导致细胞膜VE-cadherin失去稳定性而发生内吞,使细胞膜VE-cadherin减少,EC之间细胞粘着连接力降低,粘着连接削弱,但其调控机理不明。此外,多种病理因子如何改变VE-cadherin的结构和功能,造成EC粘着连接破坏和血管稳态失衡,迄今仍然是个谜,成为EC粘着连接和血管稳态研究亟需解决的一个关键科学问题。本文研究了VE-cadherin介导的内皮细胞粘着连接的调控机制,细胞学研究揭示,内外源性因素对VE-cadherin的分布有极大影响。凝血酶(Thrombin)引起内皮细胞体积变小,VE-cadherin内吞,细胞膜分布量减少,VE-cadherin介导的内皮细胞的粘着连接削弱,造成内皮细胞层通透性增加。而香烟烟雾提取物(CSE)则会引起内皮细胞体积明显增大,减少VE-cadherin细胞膜分布,导致EC粘着连接解离,同样造成内皮细胞层通透性增加。分子机制研究表明,凝血酶和CSE能够使VE-cadherin蛋白731位酪氨酸发生磷酸化,导致VE-cadherin和β-catenin内吞,内皮细胞粘着连接解离;基因芯片分析揭示,CSE可诱导内皮细胞中645个基因异常高表达,并对IL-13RA2、IL-1和DDIT3等多种炎症和内质网应激基因进行了研究;CSE还可激活P38和CREB应激信号传递通路,并抑制STAT3信号通路。此外,我们研究了血管内皮蛋白酪氨酸磷酸酶(VE-PTP)对VE-cadherin及其EC粘着连接的保护作用,VE-PTP可有效防止CSE诱导的VE-cadherin的731位酪氨酸磷酸化,增加内皮细胞VE-cadherin蛋白水平,增强EC间粘着连接,拮抗CSE对内皮细胞粘着的干扰破坏作用。综上所述,本研究揭示了凝血酶和CSE能够使VE-cadherin蛋白的731位酪氨酸磷酸化,导致EC粘着连接解离。VE-cadherin蛋白的731位酪氨酸是否发生磷酸化,是VE-cadherin介导的细胞粘着连接的调控机制的关键节点;VE-PTP可以有效地降低VE-cadherin的731位酪氨酸的磷酸化,增强VE-cadherin介导的内皮细胞间粘着连接,为研究内皮细胞粘附连接和血管稳态提供了新的思路。
【关键词】：VE-cadherin VE-PTP Thrombin CSE 细胞粘着连接
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 一、前言10-17
• 二、材料与方法17-30
• （一）材料17-20
• 1. 细胞系17
• 2. 主要实验药物17
• 3. 主要试剂17-18
• 4. 主要仪器18-19
• 5. 主要抗体19-20
• （二）方法20-30
• 1. 主要试剂的配制20-22
• 2. 细胞培养22
• 3. 瑞姬氏染色22
• 4. 细胞免疫荧光22-23
• 5. DNA microarray23
• 6. CSE对内皮细胞基因表达的作用23-27
• 7. CSE和Thrombin对内皮细胞的相关蛋白表达水平的作用27-28
• 8. 扫描电镜样品制备方法28
• 9. 细胞膜通透性的检测28-29
• 10. 细胞转染29
• 11. 统计学分析29-30
• 三、结 果30-47
• （一）凝血酶和CSE降低VE-cadherin介导的细胞粘着连接30-41
• 1. 凝血酶对VE-cadherin介导的细胞粘着连接的破坏作用30-34
• 2. CSE对VE-cadherin介导的内皮细胞粘着连接的破坏作用34-41
• （二） VE-PTP对VE-cadherin介导的细胞粘着连接保护作用41-47
• 1. VE-PTP过表达内皮细胞株的建立42
• 2. VE-PTP拮抗CSE对VE-cadherin介导的细胞粘着连接的破坏作用42-44
• 3. VE-PTP对VE-cadherin介导的细胞粘着连接的保护作用的机制探索44-47
• 四、讨 论47-50
• 1. 凝血酶和CSE使VE-cadherin介导的细胞粘着连接的解离的机制及其意义47-48
• 2. VE-PTP对VE-cadherin介导的粘着连接的保护作用的机制及其意义48-49
• 3. CSE使内皮细胞中IL13RA2基因高表达的发现与意义49-50
• 五、小 结50-51
• 六、参考文献51-56
• 综述56-70
• 参考文献64-70
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文70-71
• 攻读学位期间获奖情况71-72
• 中英文缩写词表72-73
• 致谢73-75

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本文编号：1034601