供体年龄及SDF-1α对骨髓间充质干细胞生物学功能影响的研究

发布时间：2017-10-31 04:21

  本文关键词：供体年龄及SDF-1α对骨髓间充质干细胞生物学功能影响的研究

  更多相关文章： 骨髓间充质干细胞 基质细胞衍生因子-1α AMD3100蛋白 增殖 分化 凋亡 迁移

【摘要】：目的:本研究拟探讨1)大鼠骨髓间充质干细胞(rBM-MSCs)增殖与定向分化能力的增龄性差异;2)基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)蛋白对高糖环境(25mmol/L)下rBM-MSCs增殖、凋亡及迁移能力的影响及相关分子机制。方法:1.纯化扩增不同年龄组SD大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪(FACS)分析其细胞周期;2.骨髓间充质干细胞与乳鼠心肌细胞共培养,细胞免疫荧光技术分析骨髓间充质干细胞的心肌肌钙蛋白T表达;3.采用MTT法检测细胞增殖率、Hoechst 33258染色从形态学角度观察细胞凋亡,评估SDF-1α蛋白对高糖环境下大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡能力的影响;4.通过Transwell实验评估SDF-1α对高糖环境下大鼠骨髓间充质干细胞迁移能力的影响。结果:1.细胞周期显示处于G0/G1期骨髓间充质干细胞的百分率随年龄的增加而增加;骨髓间充质干细胞的肌钙蛋白T(TnT)表达率亦随年龄的增加而减少;2.高糖培养液较低糖培养液可明显抑制r BM-MSCs增殖、促进细胞凋亡(p0.05),SDF-1α蛋白(50ng/m L)可减轻高糖培养液对rBM-MSCs增殖的抑制及凋亡的诱导作用(p0.05),CXCR4受体特异性拮抗剂AMD3100蛋白(10μg/mL)虽能进一步抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,但差异无显著性(p0.05);3.Transwell实验发现高糖培养液较低糖培养液可明显抑制rBM-MSCs的迁移作用(p0.05),SDF-1α蛋白(50ng/m L)可逆转高糖培养液对细胞迁移的抑制作用(p0.05),AMD3100蛋白(10μg/m L)可进一步抑制细胞迁移,且差异有显著性(p0.05)。结论:1.rBM-MSCs的增殖与定向分化能力随着年龄的增长而下降;2.高糖抑制rBM-MSCs的增殖、迁移及诱导其凋亡,而SDF-1α能改善高糖对rBM-MSCs增殖、迁移的抑制及凋亡的诱导作用;3.SDF-1α蛋白可能通过CXCR4受体改善高糖对rBM-MSCs迁移能力的抑制,而其改善高糖对rBM-MSCs增殖、迁移的抑制则可能通过非CXCR4受体介导,为改善BM-MSCs用于治疗冠心病合并糖代谢异常患者的心肌修复疗效进一步提供理论依据。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 基质细胞衍生因子-1α AMD3100蛋白 增殖 分化 凋亡 迁移
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.2
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-16
• 1. BM-MSCs的研究现状9-13
• 1.1 BM-MSCs的组织来源9-10
• 1.2 BM-MSCs修复心肌的相关机制10-11
• 1.3 BM-MSCs在心血管疾病的应用研究11-13
• 1.4 心血管病危险因素与BM-MSCs13
• 2. SDF-1α 蛋白在MSCs治疗缺血性心脏病的作用13-14
• 2.1 SDF-1α 蛋白及其受体13-14
• 2.2 SDF- 1α/CXCR4信号轴与缺血性心脏病干细胞治疗14
• 3. 本研究目的、内容和意义14-16
• 第一部分 供体年龄对骨髓间充质干细胞的增殖及向心肌样细胞方向分化能力的影响研究16-28
• 1 引言16
• 2 实验材料与方法16-20
• 2.1 主要试剂、耗材与仪器16-17
• 2.2 主要试剂的配制17-18
• 2.3 实验动物18
• 2.4 实验动物分组18
• 2.5 实验步骤18-20
• 3 实验结果20-25
• 3.1 观察骨髓间充质干细胞生长情况20-23
• 3.2 骨髓间充质干细胞的细胞周期检测结果23-24
• 3.3 混合培养后骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的测定24-25
• 4. 讨论25-28
• 第二部分SDF-1α 对高糖环境下骨髓间充质干细胞生物学功能的影响28-41
• 1 引言28
• 2 实验材料与方法28-31
• 2.1 主要试剂、耗材与仪器28
• 2.2 主要试剂的配制28-29
• 2.3 实验步骤29-31
• 3 实验结果31-38
• 3.1 rBM-MSCs原代培养及传代培养的细胞形态31-33
• 3.2 成骨诱导分化及成脂诱导分化鉴定rBM-MSCs33
• 3.3 SDF-1 促进高糖环境下rBM-MSCs增殖33-34
• 3.4 SDF-1 减少高糖诱导rBM-MSCs凋亡34-36
• 3.5 SDF-1α 促进高糖环境下r BM-MSCs迁移36-38
• 4. 讨论38-41
• 总结与讨论41-42
• 问题与展望42-43
• 参考文献43-51
• 在校期间发表论文清单51-52
• 致谢52

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