N-乙酰半胱氨酸保护人脐静脉内皮细胞eNOS活性及其分子机制探讨

发布时间：2018-07-10 07:49

  本文选题：人脐静脉内皮细胞 + N-乙酰半胱氨酸　； 参考：《贵州医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:观察N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-cysteine,NAC)预处理对内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)活性的影响,探讨其减轻血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)和饱和脂肪酸棕榈酸(Palmitic acid,PA)刺激人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤eNOS活性的作用机制。方法:SABC法进行HUVECs细胞鉴定后分别予以AngⅡ(1.0×10-7M、1.0×10-6M作用12h)和PA(25μM、50μM、100μM、200μM作用24h及100μM作用12h、24h、36h)刺激。此外,给予活性氧(reactive oxygen species,ROS)清除剂NAC预处理,随机分为正常对照(Control)组、AngⅡ组、单纯NAC组和NAC+AngⅡ组(1.0×10-3M NAC预处理1h后给予AngⅡ处理)以及溶媒对照(vehicle control)组、PA(50μM、100μM作用24h)组、单纯NAC组和NAC+PA组(1.0×10-3M NAC预处理1h后给予PA处理)。采用Western Blot方法检测eNOS蛋白的表达、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2A-Cα蛋白表达、PP2A C亚基Tyr307磷酸化水平以及PP2A内源性抑制蛋白I2PP2A的表达水平;化学比色法检测细胞结构型一氧化氮合酶(constitutive NOS,cNOS)的活性以及培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。结果:(1)与Control组相比,AngⅡ刺激后eNOS蛋白表达无明显变化、eNOS Ser1177磷酸化水平明显降低(p0.05),PP2A-Cα蛋白表达无明显变化、PP2A-c Y307磷酸化水平、I2PP2A蛋白表达水平明显降低(p0.05),cNOS活力、NO含量明显降低(p0.05);与vehicle control组相比,PA刺激后eNOS蛋白表达无明显变化、eNOS Ser1177磷酸化水平明显降低(p0.05),PP2A-Cα蛋白表达、PP2A-c Y307磷酸化水平及I2PP2A蛋白表达水平均无明显变化,cNOS活力、NO含量明显降低(p0.05)。(2)NAC预处理后,与同浓度AngⅡ组相比,eNOS蛋白表达无明显变化、eNOS Ser1177磷酸化水平显著升高(p0.05),PP2A-Cα蛋白表达无明显变化、PP2A-c Y307磷酸化水平、I2PP2A蛋白表达水平均显著升高(p0.05),cNOS活力、NO含量明显增加(p0.05);NAC预处理后,与同浓度PA组相比,eNOS蛋白表达无明显变化、eNOS Ser1177磷酸化水平显著升高(p0.05),PP2A-Cα蛋白表达、PP2A-c Y307磷酸化水平及I2PP2A蛋白表达水平仍无明显变化,cNOS活力、NO含量增加(p0.05)。结论:(1)NAC预处理可保护AngⅡ和PA刺激所引起的eNOS活性降低,NO产生增加,从而发挥内皮细胞保护作用,且保护作用机制可能不同。(2)AngⅡ和PA刺激均可引起HUVECs中eNOS活性降低,NO产生减少,内皮细胞功能受损,但分子机制不同。AngⅡ可能通过降低PP2A-c Y307和I2PP2A使PP2A活性增加,最终导致eNOS活性降低;PA则可能通过其他机制导致eNOS活性降低。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of N-Acetyl-cysteine (NAC) pretreatment on the activity of endothelial nitric oxide synthase (endothelial nitric oxide). To investigate the mechanism of angiotensin 鈪，

本文编号：2112695