丹参酮ⅡA磺酸钠通过SIRT1-FOXO3a通路改善低氧性肺动脉高压

发布时间：2018-07-10 09:34

  本文选题：肺动脉高压 + 肺动脉平滑肌细胞　； 参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对低氧性肺动脉高压(HPH)的影响,并探讨SIRT1-FOXO3a通路在其中的作用机制。方法:将购自河北医科大学动物实验中心的SD大鼠随机分为3组,每组各8只,分别为常氧组、低氧组、低氧+STS组。低氧组及低氧+STS组SD大鼠饲养于常压低氧箱内,其氧浓度控制在(10±0.5)%,常氧组大鼠呼吸正常空气,与低氧组、低氧+STS组大鼠放于同一房间以相同饲料饲养。于造模开始起,低氧+STS组大鼠每日腹腔注射STS 10mg/kg,常氧组及低氧组大鼠注射相同剂量的生理盐水,连续8周。造模结束后分析比较三组大鼠右心肥厚指数(RVHI),平均肺动脉压力(mPAP)等指标,观察肺小动脉HE染色等,分析STS对HPH的影响。体外培养原代人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs),取5~8代作为实验用细胞。首先将hPASMCs设为6组,分别为常氧组、低氧组、低氧+不同浓度STS(0.1μmol/L,1.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L)干预组,常氧组为37℃、5%CO2和95%空气的培养箱内孵育24h,低氧组及低氧+不同浓度STS干预组分别置于37℃、3%O2、5%CO2、92%N2的三气培养箱内孵育24h。行MTT实验测定细胞增殖情况,分析低氧及STS对hPASMCs的影响,并筛选最佳STS干预浓度。重新取5~8代hPASMCs并将其设为5组,分别为常氧组、低氧组、低氧+STS(25μmol/L)组、低氧+白藜芦醇(RE,40μmol/L)组、低氧+STS(25μmol/L)+尼克酰胺(NAM,200μmol/L)组。不同干预因素处理后,再次比较细胞增殖情况,并采用蛋白免疫印迹(Western blot)和实时定量(RT)-PCR分别检测各组SIRT1、FOXO3a、PCNA的表达情况。结果:长期慢性低氧可导致SD大鼠肺动脉管壁增厚,mPAP增高,RVHI增高(P0.05),肺动脉中膜增厚,应用STS干预后可明显降低上述指标的改变程度(P0.05),改善HPH。在细胞实验中,低氧可显著刺激hPASMCs增殖(P0.05),应用STS及SIRT1激动剂RE干预后,hPASMCs中SIRT1及FOXO3a表达同向增加(P0.05),PCNA表达减少(P0.05),hPASMCs增殖减少(P0.05)。而应用SIRT1抑制剂NAM处理后,SIRT1及FOXO3a表达减少(P0.05),细胞增殖活跃,提示NAM在一定程度上削弱了STS通过SIRT1-FOXO3a通路发挥抑制hPASMCs增殖的作用。结论:长期慢性低氧可引起并加重大鼠肺动脉高压,应用STS治疗后,肺动脉高压指标可明显改善,提示STS可在一定程度上起到防治HPH的作用,而通过SIRT1-FOXO3a通路抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖可能是STS实现治疗肺动脉高压的机制之一。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of sodium tanshinone 鈪，

本文编号：2112957