PBMC分泌的miR-4306通过VEGFA调控人冠状动脉内皮细胞的迁移和增殖

发布时间：2018-11-06 19:30

【摘要】：研究背景:人外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)分泌的微颗粒(Microparticles,MP)参与冠心病发病机制(脂质代谢紊乱、炎症免疫反应等)中所涉及的多种病理生理途径。我们的前期研究发现,冠心病患者PBMC来源的MP(PBMC-MP)中的miR-4306表达较健康人明显增加,但PBMC-MP中的miR-4306与冠心病的病情关系及miR-4306对人冠状动脉内皮细胞(Human coronary artery endothelial cells,HCAECs)的作用及机制仍不清楚。目的:本研究旨在探讨冠心病患者PBMC-MP中miR-4306与冠心病的病情关系及miR-4306对HCAECs的作用及机制。方法:1.临床实验分组:血液标本分别来自对照人群(健康人)和冠心病人群。分组如下:对照组、单支病变组、多支病变组;对照组、择期PCI组、急诊PCI组。2.细胞实验分组:根据不同实验目的,分为PBMC-MP对照组、PBMC-MP择期PCI组、PBMC-MP急诊PCI组;Control组、miR-4306mimics组;Control组、miR-4306 inhibitor组。3.采取实验对象全血9 ml,提取PBMC-MP,流式细胞术证实MP是否来源于PBMC。qRT-PCR检测健康人和冠心病患者PBMC-MP中miR-4306的表达水平。4.双荧光素酶报告基因测试miR-4306对SLC16A2基因和VEGFA基因是否有靶向调控作用。5.免疫荧光证实hcaecs是否吞噬mp,qrt-pcr检测不同时间段hcaecs吞噬mp后mir-4306的表达水平。westernblot、乳酸试剂盒、transwell小室、cck8分别检测hcaecs吞噬mp后slc16a2和vegfa的蛋白表达水平、hcaecs的乳酸代谢、迁移和增殖能力。6.用negativecontrol,hsa-micro-4306-mimics,micrornainhibitorn.c,hsa-micro-4306-inhibitor分别转染hcaecs,qrt-pcr检测hcaecs中mir-4306的表达水平。westernblot、乳酸试剂盒、transwell小室、cck8分别检测hcaecs的slc16a2和vegfa的蛋白表达水平、乳酸代谢、迁移和增殖能力。结果:1.与对照组相比,单支病变组和多支病变组pbmc-mp中的mir-4306表达明显增加(p0.05和p0.01),且多支病变组中mir-4306的表达明显高于单支病变组(p0.05)。与对照组相比,择期pci组和急诊pci组pbmc-mp中mir-4306的表达增加(p0.05和p0.01),且急诊pci组中mir-4306的表达明显高于择期pci组(p0.01)。2.双荧光素酶报告基因测试结果表明hsa-mir-4306对slc16a2基因和vegfa基因有中度靶向调控作用。3.hcaecs于12~24h和24~36h两个时间段吞噬mp能力最强,并且hcaecs吞噬mp后mir-4306的表达于12h突然增加,于36h达到最高峰值后开始下降。4.slc16a2蛋白表达在pbmc-mp对照组、pbmc-mp择期pci组和pbmc-mp急诊pci组之间无明显差异(p0.05),同时hcaecs的乳酸代谢值在三组间无明显变化(11.47±0.72 mM、13.4±0.53 mM、14.2±0.39 mM,P0.05)。PBMC-MP择期PCI组中VEGFA蛋白的表达明显低于PBMC-MP对照组(P0.05);与PBMC-MP对照组相比,PBMC-MP择期PCI组中HCAECs的迁移能力明显下降(P0.05),HCAECs的增殖能力于24~48 h时下降最显著(P0.05)。5.与各自对照相比,miR-4306 mimics组和miR-4306 inhibitor组可明显增加和降低HCAECs中miR-4306的表达(P0.01和P0.01),同时抑制和上调SLC16A2和VEGFA蛋白的表达(P0.01和P0.01;P0.05和P0.05)。与各自对照组相比,miR-4306 mimics组和miR-4306 inhibitor组的乳酸代谢能力没有差别(乳酸代谢值分别为12.86±0.29 mM,11.43±0.41 mM,P0.05;12.14±0.18 mM,13.57±0.57 mM,P0.05)。与各自对照相比,miR-4306 mimics组和miR-4306 inhibitor组分别降低和增加HCAECs的迁移能力(P0.01和P0.01),不改变HCAECs的增殖能力(P0.05和P0.05)。结论:1、miR-4306抑制HCAECs中靶基因VEGFA的蛋白表达,降低HCAECs的迁移和增殖能力;miR-4306抑制HCAECs中靶基因SLC16A2的蛋白表达,但对HCAECs的乳酸代谢没有影响。2、与健康人相比,冠心病患者PBMC-MP中miR-4306表达增加,并且与冠脉病变的严重程度和病情急缓呈正相关。
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【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R541.4

【参考文献】