橙皮素后处理通过抑制自噬与凋亡减轻心肌缺血再灌注损伤

发布时间：2019-08-09 16:38

【摘要】：及时恢复急性心肌梗死(AMI)患者冠脉血流是挽救缺血心肌的根本措施,但缺血心肌在迅速恢复血流的同时会出现再灌注损伤。自噬广泛存在于真核细胞中,是细胞自我消化及更新的过程,自噬在心肌缺血/再灌注(I/R)诱导的心肌损伤中起着重要调节作用。橙皮苷(HES),柑橘类水果提取物,对不同器官缺血/再灌注损伤具有保护作用,但是橙皮苷在心肌缺血/再灌注损伤过程中的作用尚未见相关报道。橙皮素(hesperetin,HPT)是橙皮昔的活性代谢产物,具有强烈的抗炎症、抗氧化及抗肿瘤的作用。此外,研究报道其在心血管系统中有抗血栓的潜在效果,但橙皮素在心肌I/R损伤过程中的作用及机制尚未清楚。在本研究实验,我们将研究橙皮素后处理对心肌I/R损伤过程中自噬的调节作用及其潜在机制。实验利用体内C57BL/6小鼠心肌I/R损伤模型和体外新生SD大鼠原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型。通过结扎小鼠的冠状动脉左前降支30 min,接着解除结扎线恢复心肌血流再灌注120 min,模拟心肌I/R损伤;而在体外模拟原代心肌细胞H/R损伤是通过将心肌细胞中含胎牛血清培养基换成PBS缺氧3 h,接着又换成含胎牛血清培养基复氧3 h。通过TTC/伊文氏蓝染色法测定心肌I/R过程中HPT后处理对C57BL/6小鼠心肌梗死面积;MTS法测定H/R过程中HPT后处理对新生SD大鼠原代心肌细胞活性的影响;Western blot法检测自噬与凋亡的标记蛋白;透射电子显微镜(TEM)观察自噬小体数量及细胞线粒体的超微结构变化;免疫荧光染色法检测自噬标记蛋白LC3。HPT后处理减少I/R过程心肌梗死面积及H/R过程原代心肌细胞死亡;Western blot显示LC3BⅡ减少、LC3B Ⅱ/Ⅰ比值降低,Beclinl降低,p62增加;TEM显示自噬小体数量减少;免疫荧光染色显示LC3减少。这些结果提示HPT后处理保护心肌I/R损伤,抑制I/R过程中细胞自噬。在此基础上,我们进一步探索HPT后处理抑制自噬的具体信号通路,western blot显示PI3K,Akt,mTOR蛋白的磷酸化水平增加,通过加入LY294002或者BEZ235(PI3K/Akt通路的特异性抑制剂),结果提示HPT后处理对自噬的抑制作用被部分阻断。综上所述,通过体内、体外模型的一致结果,我们大胆认为HPT后处理可保护心肌I/R损伤,其机制可能与活化PI3K/Akt/mTOR通路抑制心肌细胞自噬有关。
【图文】：

过程,后处理,心肌

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自噬,心肌,后处理,过程

图４．邋ＨＰＴ后处理显著抑制心肌Ｉ／Ｒ过程的自噬逡逑３２逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R54

【参考文献】