缺血预适应过程中心肌细胞容量调节及缝隙连接蛋白43表达的变化及意义

发布时间：2020-04-02 00:36

【摘要】：背景与目的:缺血预适应是一种有效的内源性保护机制,可以保护心肌细胞免受缺血再灌注损伤,但其具体机制尚不明确。研究表明心肌缺血预适应可能通过影响心肌细胞容量调节的能力来达到心肌保护作用,也与心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)表达有关,尚未见同时评价在缺血预适应过程中心肌细胞容量调节及Cx43表达变化的报道。本研究旨在探讨在缺血预适应过程中心肌细胞容量调节及Cx43表达的变化及其意义。方法:体外培养大鼠心肌细胞系H9C2,分别给予模拟缺血再灌注处理(I/R组,缺氧8h,复氧6h)、模拟缺血预适应处理(IPC组,预进行3个缺氧5min/复氧5min循环,再进行缺血再灌注处理)和缝隙连接蛋白阻滞剂18α-甘草次酸预处理(AGA组,18α-甘草次酸预处理48h,再进行缺血预适应处理),通过光镜观察各组细胞形态、CCK-8(Cell counting kit-8)检测各组心肌细胞存活率、hoechst33342染色测定心肌细胞凋亡率、IPP软件计算细胞容积从而测定细胞调节性容量减少(RVD)能力、Western Blot和细胞免疫荧光染色检测Cx43蛋白表达。结果:(1)正常的H9C2心肌细胞形态多样,呈纺锤体形或多角形,大小均一。I/R组H9C2心肌细胞大小不一、圆形皱缩细胞明显增多。IPC组圆形皱缩细胞较I/R组有所减少。而AGA组圆形皱缩细胞有所增加,与I/R组无明显差异。(2)与I/R组比较,IPC组心肌细胞存活率增加(46.23±5.285%v.s.68.90±7.546%,p0.01)、心肌细胞凋亡比例减少(16.46±5.170%v.s.9.105±2.516%,p0.05)、心肌细胞RVD能力增加(36.08±6.413%v.s.47.42±4.547%,p0.01)、心肌细胞Cx43蛋白表达增加(细胞免疫荧光染色:212.1±17.66 v.s.325.6±20.94,p0.05;Western blot:0.093±0.022 v.s.0.282±0.049,p0.01);与IPC组比较,AGA组心肌细胞存活率明显下降(50.57±7.622%,p0.01)、心肌细胞凋亡比例增加(15.61±4.805%,p0.05)、RVD能力明显下降(39.57±4.199%,p0.05)、心肌细胞Cx43蛋白表达减少(细胞免疫荧光染色:210.4±19.42,p0.05;Western blot:0.095±0.021,p0.01)。结论:在模拟缺血预适应过程中,心肌细胞容量调节能力及缝隙连接蛋白43表达均增加,缝隙连接蛋白阻滞剂逆转上述作用,提示心肌细胞容量调节及缝隙连接蛋白43可能参与缺血预适应,但缝隙连接蛋白43是否与心肌细胞容量调节相关,目前尚不明确。
【图文】：

细胞形态,光镜,缺血再灌注,缺血预适应

结果下观察各组细胞形态图 1 所示，正常的 H9C2 心肌细胞形态多样，呈纺锤体形或多角形与对照组比较，缺血再灌注组 H9C2 心肌细胞轮廓不清、大小不一胞明显增多，提示缺血再灌注对心肌细胞造成损伤。与缺血再灌注组适应组圆形皱缩细胞有所减少，提示缺血预适应组心肌细胞损伤缺血预适应组比较，缝隙连接蛋白阻滞剂 18α-甘草次酸组圆形皱缩，与缺血再灌注组无明显差异，提示在模拟缺血预适应过程中，缝阻滞后，即缝隙连接蛋白表达减少时，缺血预适应可能失去了对心作用。

统计图,细胞存活率,缺血预适应

差异有统计学意义（p<0.01）；与缺血预适应组比较，缝隙连接蛋白阻滞剂 18α-甘草次酸组心肌细胞存活率明显下降，有统计学差异（p<0.01）。图2 各组细胞存活率注： Con:对照组，I/R：模拟缺血再灌注组，IPC：模拟缺血预适应组，AGA：18α-甘草次酸预处理组。各组细胞存活率统计图数值以 Χ ± S表示,n=3。**：与Con组比较，，p<0.01;&&:与I/R组比较，p<0.01；##：与IPC组比较，p<0.01。3 各组细胞凋亡比例通过 Hoechst33342 染细胞核观察各组细胞凋亡情况。凋亡细胞核形态表现为染色加深、高亮即为核浓缩或者核周有小碎片。如图 3A 所示，对照组心肌细胞核染色均一、形态比较完整
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541

【参考文献】