Zip7表达及锌稳态对H9c2心肌肥厚细胞影响的研究

发布时间：2020-04-17 07:57

【摘要】：研究目的:构建大鼠H9c2心肌肥厚细胞实验模型,探索心肌肥厚细胞中锌离子水平及锌转运体Zip7的表达变化,验证锌稳态对心肌细胞的影响。研究方法:第一部分建立心肌肥厚细胞实验模型:本课题选择大鼠胚胎心脏组织中的H9c2心肌细胞作为实验对象,在相同培养条件下随机分为对照组及实验组,实验组利用血管紧张素II(Ang Ⅱ 0.2uM)诱导H9c2心肌细胞24小时培养成心肌肥厚细胞,通过倒置显微镜比较两组心肌细胞形态差异、利用实时定量PCR(Q-PCR)方法检测两组细胞心肌肥大因子ANP、BNP、β-MHC的mRNA水平表达情况、利用Western Blot(WB)方法检测BNP的蛋白水平表达情况。第二部分检测H9c2心肌细胞中锌离子水平及锌转运体Zip7的表达情况:心肌肥厚细胞实验模型建立成功后,应用电感耦合等离子原子发射光谱法(ICPOES)检测对照组(Control)及实验组(Ang Ⅱ)H9c2心肌细胞中锌离子浓度,应用Q-PCR及Western Blot方法分别检测两组心肌细胞中锌转运体Zip7的mRNA水平和蛋白水平表达情况。第三部分验证不同浓度锌离子对心肌细胞中Zip7表达及锌稳态的影响:在构建心肌肥厚细胞实验模型成功的基础上,通过外源锌离子干预重新进行分组实验:对照组(Control)、对照组加锌离子螯合剂10uM(Control+TPEN)、实验组(Ang Ⅱ)、实验组加锌离子螯合剂10uM(Ang Ⅱ+TPEN)、实验组加氯化锌1uM及锌离子载体(Ang Ⅱ+Zn1)、实验组加氯化锌5uM及锌离子载体(Ang Ⅱ+Zn5)、实验组加氯化锌10uM及锌离子载体(Ang Ⅱ+Zn10);利用Q-PCR及Western Blot方法分别检测各组H9c2心肌细胞中锌转运体Zip7、BNP的mRNA水平和蛋白水平表达情况。研究结果:1.通过倒置显微镜比较两组心肌细胞形态差异,与对照组相比,实验组心肌细胞胞体直径变长,细胞表面积变大,细胞间无空隙。Q-PCR结果显示实验组心肌细胞ANP、BNP、β-MHC的mRNA水平表达均高于对照组(P0.05),Western Blot结果显示实验组心肌细胞BNP的蛋白水平表达高于对照组(P0.05),差异具有统计学意义。2.ICPOES结果显示实验组心肌细胞中锌离子浓度明显高于对照组(P0.05)。Q-PCR及Western Blot结果显示实验组心肌细胞锌转运体Zip7的mRNA水平和蛋白水平表达均高于对照组(P0.05),差异具有统计学意义。3.给予不同浓度锌离子干预H9c2细胞后Q-PCR及Western Blot结果显示:(1)Control+TPEN组H9c2心肌细胞中Zip7的mRNA及蛋白表达水平均高于Control组(P0.05),差异有统计学意义;(2)Ang Ⅱ+TPEN组H9c2心肌细胞中Zip7的mRNA及蛋白表达水平均高于Ang Ⅱ组(P0.05),差异有统计学意义;(3)给予氯化锌干预后H9c2心肌肥厚细胞中Zip7的mRNA及蛋白表达水平均低于Ang Ⅱ组(P0.05),随着氯化锌浓度的增加,心肌细胞中Zip7的表达水平呈梯度下降趋势,差异具有统计学意义;(4)Control+TPEN组H9c2心肌细胞中BNP的mRNA及蛋白表达水平均高于Control组(P0.05),差异有统计学意义;(5)Ang Ⅱ+TPEN组H9c2心肌细胞中Zip7的mRNA及蛋白表达水平与Ang Ⅱ组之间的差异无统计学意义;(6)给予1uM氯化锌干预后,H9c2心肌肥厚细胞中BNP的表达水平与Ang Ⅱ组之间的差异无统计学意义,随着氯化锌浓度的增加,心肌细胞中BNP的表达水平低于Ang Ⅱ组(P0.05),呈梯度下降趋势,差异具有统计学意义。研究结论:1.本研究在细胞水平成功利用Ang Ⅱ诱导H9c2心肌细胞构建心肌肥厚细胞实验模型。2.心肌肥厚细胞中锌离子浓度与锌转运体Zip7表达水平均明显升高。3.心肌细胞中锌离子水平与锌转运体Zip7的表达水平呈负相关。给予锌离子干预后心肌肥厚细胞中BNP的表达水平有所下降,初步证实维持锌稳态对心肌细胞具有保护作用,但具体的保护作用机制有待深入研究。
【图文】：

构建心肌肥厚细胞实验模型分组示意图

图 9.给予不同浓度氯化锌以及锌离子螯合剂分组示意图如图 9 所示，在心肌肥厚细胞实验模型成功的基础上，给予不同浓度氯化锌及锌离子螯合剂进行分组实验：对照组（Control）、对照组加锌离子螯合剂10uM（Control+TPEN）处理 2h、实验组（Ang II）、实验组加锌离子螯合剂（AngII +TPEN）处理 2h、实验组加氯化锌 1uM 及锌离子载体 4uM（Ang II +Zn1）处理 30min、实验组加氯化锌 5uM 及锌离子载体 4uM（Ang II+Zn5）处理 30min、实验组加氯化锌 10uM 及锌离子载体 4uM（Ang II +Zn10）处理 30min。4.2 Q-PCR 法检测各组心肌细胞 Zip7 及 BNP 的 mRNA 水平表达按照前文实验步骤利用 Q-PCR 方法检测各组 H9c2 心肌细胞中锌转运体Zip7 及 BNP 的 mRNA 水平表达情况（参照 2.4.1.2）。4.3 WB 法检测各组心肌细胞 Zip7 及 BNP 的蛋白水平表达按照前文实验步骤利用 WB 方法检测各组 H9c2 心肌细胞中锌转运体 Zip7
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R541.6

【相似文献】

相关博士学位论文 前1条

1 田甜;利用二次打击惊厥模型探讨生酮饮食和褪黑素长程干预对新生期惊厥性脑损伤的影响及机制[D];苏州大学;2016年

相关硕士学位论文 前4条

1 于婧;Zip7表达及锌稳态对H9c2心肌肥厚细胞影响的研究[D];天津医科大学;2019年

2 张玉超;斑马鱼ZIP7基因在早期胚胎发育过程中功能初步研究[D];华中农业大学;2011年

3 喻俊磊;ZIP7(SLC39A7)基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中的功能研究[D];南昌大学;2012年

4 徐丹凤;生酮饮食对新生期反复惊厥大鼠远期神经行为损伤及相关分子表达的影响[D];苏州大学;2015年

，

本文编号：2630635