SPARC在MDS中的表达及其对骨髓基质细胞的影响

发布时间：2020-04-24 08:32

【摘要】：目的:通过MDS细胞株和骨髓基质细胞共培养,研究SPARC过表达对骨髓基质细胞的影响,揭示SPARC对骨髓基质细胞的作用机制,为临床靶向治疗提供新的线索。方法:1.收集了近4年来在重庆医科大学附属第一医院确诊为MDS的患者骨髓标本,通过qRT-PCR检测骨髓中SPARC mRNA的表达;2.构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体,转染至人MDS细胞株SKM-1细胞,流式细胞术检测转染效率,qRT-PCR检测SKM-1细胞中SPARC mRNA表达;3.将SKM-1细胞与骨髓基质细胞HS-5细胞直接共培养,实验分为三组(实验组SKM-1/HBLV-hSPARC+HS-5;空白组SKM-1/HBLV-GFP-puro+HS-5;对照组SKM-1+HS-5)。检测共培养24h后HS-5细胞生物学的变化:CCK-8法和流式细胞术检测HS-5细胞增殖、细胞周期与细胞凋亡;qRT-PCR检测bcl-2、bax、p53、fas以及caspase-9 mRNA表达;Western blot检测bcl-2、bcl-w和caspase-8蛋白表达。结果:1.MDS患者骨髓中SPARC mRNA表达水平相较于健康对照组显著升高;2.上调SPARC基因在共培养体系中的表达,可以阻滞细胞周期从而抑制HS-5细胞增殖,促进HS-5细胞凋亡。结论:1.SPARC在MDS患者中可能作为一个癌基因;2.在共培养中上调SPARC的表达,抑制骨髓基质细胞的增殖,促进细胞凋亡。
【图文】：

26图 5 载体酶切产物及重 慢 毒载体阳性克隆鉴定Figure.5 Enzyme products and cloning identificatioA：重 慢病毒载体酶切产物电泳结果（1： SPAR增 SPARC 基因电泳结果（1： Marker ；2： S鉴定（1： Marker ；2-7 ： SPARC 单克隆鉴2.2 流式 胞术检测慢 毒载体转染
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R551.3

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本文编号：2638747