雌激素对低氧性肺动脉高压的保护作用及巨噬细胞不同表型的影响

发布时间：2020-04-24 15:24

【摘要】：目的:肺动脉高压发病机制复杂,涉及多种细胞多个途径,而肺巨噬细胞在肺动脉高压的发病机制中所起作用尚不明确。本研究主要探究雌激素对低氧性肺动脉高压的保护作用,以及在此过程中巨噬细胞表型的变化。方法:将36只雌性SD大鼠按随机数字表法平均分为6组(各组n=6):假手术+常氧组、假手术+低氧组、去势+常氧组、去势+低氧组、去势+常氧+17β雌二醇(E2)组、去势+低氧+E2组。去势组即手术切除卵巢;而非去势组(假手术组)则打开腹腔找到卵巢不予处理,直接还纳缝合。低氧组置于低氧箱内饲养,常氧组则给予正常空气。去势+常氧+E2组与去势+低氧+E2组给予皮下注射E2[20ug/(kg·d)],其余组皮下注射生理盐水(0.1ml/d)。饲养8周建立低氧性肺动脉高压模型。通过右心导管检测每组动物的平均肺动脉压(mPAP)并称量左右心室、室间隔以计算右心室肥厚指数(RVHI)。M1型与M2型巨噬细胞的测定:免疫荧光检测M1与M2型巨噬细胞表面标志物iNOS、CD206表达水平,利用RT-PCR及Western blot法检测各组iNOS、CD206 mRNA及蛋白表达水平。结果:1.成功建立了HPAH大鼠模型与假手术+常氧组相比,假手术+低氧组与去势+低氧组随着低氧时间延长出现反应迟钝、毛色晦暗、呼吸加快、进食水量逐渐减少,最终大部分呈静卧状态,无死亡标本。而去势+低氧+E2组增长速度也减慢,活动度较假手术+低氧组与去势+低氧组相比略好,与假手术组比较,去势+常氧组、去势+常氧+E2组变化不明显。2.各组样本的mPAP和RVHI与假手术+常氧组、去势+常氧组、去势+常氧+E2相比,假手术+低氧组与去势+低氧组的mPAP和RVHI均升高(P均㩳0.05),且符合肺动脉高压的压力水平,去势+低氧+E2组大鼠mPAP和RVHI也相对升高(P均㩳0.05),但低于去势+低氧组与假手术+低氧组,提示雌激素可改善低氧性肺动脉高压。3.各组肺组织的形态学改变:与假手术+常氧组、去势+常氧组、去势+常氧+E2相比,假手术+低氧组与去势+低氧组肺动脉壁增厚,动脉管腔明显狭窄,炎症细胞浸润严重,符合肺动脉高压形态学改变,而去势+低氧+E2组相比去势+低氧组与假手术+低氧组,肺动脉管腔出现不同程度的逆转,炎症细胞浸润相对减少。4.免疫荧光染色鉴别M1型巨噬细胞及M2型巨噬细胞在各组样本肺组织中的表达:去势+低氧组M1型巨噬细胞表面标志物iNOS蛋白相对表达量明显高于假手术+常氧组(P㩳0.05)。假手术+低氧组iNOS蛋白表达低于去势+低氧组(P㩳0.05),去势+低氧+E2组iNOS蛋白表达亦低于去势+低氧组(P㩳0.05)。去势+低氧组M2型巨噬细胞表面标志物CD206蛋白相对表达量高于假手术+常氧组(P㩳0.05)。去势+低氧+E2组CD206蛋白相对表达量则高于于去势+低氧组(P㩳0.05)。5.RT-PCR及Western blot检测各组样本肺组织中iNOS及CD206mRNA、蛋白的表达水平与常氧组相比,低氧组肺组织iNOS mRNA及蛋白水平均明显升高,给予E2干预后iNOS mRNA及蛋白水平较低氧+去势组下降(P均0.05),但仍高于常氧组(P均0.05);而低氧组肺组织的CD206 mRNA及蛋白水平表达较常氧组也升高,给予E2干预后CD206 mRNA及蛋白水平较低氧+去势组升高(P均0.05)。结论:长期慢性低氧可诱导HPAH的发生,在此过程M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞表达均增加,雌激素可能通过降低M1型巨噬细胞的表达、促进M2型细胞的极化从而改善肺动脉高压。
【图文】：

照片,苏木精,伊红,巨噬细胞

图 1 各组大鼠肺动脉形态学改变（苏木精伊红染色 ×100）g.1 Morphological changes of pulmonary arteries in rats of each gro(hematoxylin eosin staining x 100)1) :sham operation normoxic group, 2) :sham operation hypoxia gariectomy normoxic group, 4):ovariectomy hypoxia group,ectomy normoxic+E2 group, 6):ovariectomy hypoxia+E2. 免疫荧光染色鉴别 MI 型巨噬细胞及 M2 型巨噬细胞在各组样的表达。（每张照片阳性的累积光密度值（IOD）以及组织的（AREA）并求出平均光密度值（average optical, AO 值OD/AREA，AO 值越大表明阳性表达水平越高）（见 Fig.2、F4）势+低氧组 M1 型巨噬细胞表面标志物 iNOS 蛋白相对表达量

荧光染色,免疫荧光染色

图 2 各组大鼠免疫荧光染色评价 M1 型巨噬细胞浸润（免疫荧光染色 ×200）ig.2 Evaluation of M1 macrophage infiltration by immunofluorescestaining in rats of each group (immunofluorescence staining x 200
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R544.1

【参考文献】