大鼠心肌细胞和H9C2心肌细胞株表达弹性蛋白

发布时间：2020-04-25 00:40

【摘要】：背景弹性蛋白是弹性纤维的主要组成成分,赋于所在器官以良好的弹性。弹性纤维在许多疾病的发生发展中起着重要作用,尤其是心肌梗死、高血压及主动脉夹层等常见疾病均可造成弹性纤维变化。研究表明成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞均能分泌原弹性蛋白,而心肌细胞是否也能够合成和分泌弹性蛋白,尚未见文献报道。目的探讨弹性蛋白在大鼠心肌组织、心肌细胞、H9C2心肌细胞株、人脐静脉内皮细胞株上的表达及分泌情况,旨在为心脏基础医学和临床研究提供形态学基础和理论依据。方法(1)取6w成年和新生3d内的SD大鼠心脏各5例,固定、脱水、包埋后连续冰冻切片,片厚6μm。(2)取新生3d SD大鼠心脏组织,经0.05%胰酶和0.075%的Ⅱ型胶原酶消化,差速贴壁法获取新生大鼠原代心肌细胞。(3)免疫组织化学、免疫荧光技术检测弹性蛋白在心肌组织、新生大鼠原代心肌细胞、H9C2心肌细胞株、人脐静脉内皮细胞株的表达情况,以及与心肌肌钙蛋白T的共表达情况。(4)Elisa法检测细胞株上清液中弹性蛋白的含量。结果(1)新生和成年SD大鼠的心肌细胞和细胞间质中均可见弹性蛋白阳性表达,但呈局域性分布。在心肌细胞横切面和纵切面上可见弹性蛋白主要表达于细胞质内,细胞核上也可观察到少量表达。表达弹性蛋白的心肌细胞中肌钙蛋白T(cTnT)表达阳性,证明其细胞是心肌细胞。(2)弹性蛋白在新生大鼠心肌细胞、H9C2心肌细胞株以及人脐静脉内皮细胞上均见到阳性表达。(3)Elisa法可以检测到H9C2心肌细胞株上清液中弹性蛋白的存在,但含量较少,而人脐静脉内皮细胞株上清液中未检测到弹性蛋白的分泌。结论大鼠心肌细胞、H9C2心肌细胞株、人脐静脉内皮细胞株和心内膜内皮细胞均表达弹性蛋白。心肌细胞分泌的弹性蛋白主要分布于心肌细胞内部,对间质的贡献较少。
【图文】：

弹性蛋白,免疫荧光,心肌组织,免疫组织化学

图 1 SD 大鼠心肌组织弹性蛋白的表达，免疫组织化学（A、B）和免疫荧光（C、D）显色标尺示 50μmA1：弹性蛋白在小血管周围集中分布；A2：弹性蛋白在心内膜（↑）侧表达较多；B1、B2：弹性蛋白在心肌细胞内（分别为横切面和纵切面）呈强阳性表达C：新生 SD 大鼠心肌组织切片的免疫荧光显色。C1:DAPI 染色（蓝）；C2：心肌肌钙蛋白 T（绿），C3：弹性蛋白（红）;C4：C1、C2、C3 的叠加D：成年 SD 大鼠心肌组织切片的免疫荧光显色。D1:DAPI 染色（蓝）；D2：心肌肌钙蛋白 T（绿），D3：弹性蛋白（红）;D4：D1、D2、D3 的叠加E:心肌组织弹性蛋白免疫荧光显色积分吸光度值；F:心肌组织弹性蛋白免疫组织化学显色积分吸光度值Fig.1 The expression of elastin in rat myocardium. Immunohistochemistry(A、B) andImmunofluorescence (C、D) staining Bar=50μmA1:The concentrated distribution of elastin around the blood vessel;A2:The concentrated

弹性蛋白,心肌细胞,肌钙蛋白T,共表达

细粒排列成发丝样。弹性蛋白在原代心肌细胞上主要表达于细胞质和细胞膜，，细胞核上也可观察到少量表达（图2A2）。弹性蛋白在 H9C2 心肌细胞株细胞和细胞团上呈强阳性表达，分布特点与原代心肌细胞类似（图 2B1、B2）。免疫细胞荧光的结果更清晰地显示心肌肌钙蛋白和弹性蛋白在原代心肌细胞（图 2C）和 H9C2 心肌细胞株（图 2D）上呈现共表达，且共表达率近乎 100%。
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R54

【参考文献】