【摘要】：目的:心脏肥大是心脏对血流动力学改变的一种适应性反应。高血压、瓣膜病等引起的心脏肥大是一种代偿反应,早期心脏功能增加,伴有心脏胚胎基因再表达,逐渐会发生间质纤维化、细胞凋亡增加,心功能下降,最终心脏衰竭,称为病理性心脏肥大。生理性心脏肥大是指后天的生长发育、妊娠、运动训练引起的心脏肥大,其心脏结构正常,无心脏胚胎基因再表达和间质纤维化,心功能正常或增加,这种肥大是可逆性的、且一般不会进展为心脏衰竭。microRNA是短链非编码RNA,通过与靶基因3’-UTR互补结合,在转录后水平调控mRNA的表达。microRNAs参与许多生理和病理过程的调节,关于microRNA与病理性心脏肥大的研究较多,但其与生理性心脏肥大的机制仍不十分清晰。本课题利用心脏特异过表达miR-223小鼠和miR-223过表达NRCM诱导心脏肥大,并进行了机制研究,可为临床治疗心脏肥大提供理论基础。方法:1.应用踏板运动训练诱导生理性心脏肥大小鼠模型,通过RT-PCR检测肥大心脏组织中miR-223表达水平。2.在α-MHC构建心脏特异表达的miR-223过表达小鼠模型中,观察HW/BW,进行WGA染色、Masson染色测定细胞大小及纤维化程度,利用RT-PCR测定纤维化标记物及心脏胚胎基因的表达水平,应用心脏超声检测LVPWd、LVPWs、IVSd、IVSs、EF、FS等指标。3.分离培养NRCM,构建Ad.miR-223及Ad.GFP并转染NRCM,通过免疫荧光染色观察过表达miR-223的NRCM细胞形态及大小。4.利用RNAseq检测miR-223 TG小鼠心脏中基因表达变化,并通过RT-PCR检测TG小鼠心脏及miR-223过表达NRCM中部分基因表达变化。5.利用western blot检测miR-223 TG小鼠心脏及miR-223过表达NRCM中Akt、磷酸化Akt等蛋白表达水平。6.通过荧光素酶实验验证FBXW7和Acvr2a是否为miR-223的靶基因。结果:1.4周踏车运动后,运动组小鼠表现为心脏肥大(运动组HW/BW为5.02±0.52,对照组为HW/BW4.23±0.18),且肥大心脏组织中miR-223表达增加(2.047±0.069,n=4,p0.05)。2.通过ɑ-MHC启动子建立心脏特异性过表达mi R-223小鼠模型,Line#6,Line#10和Line#15基因型鉴定为阳性,其中Line#6,Line#10成功传代。与WT比较,Line#6和Line#10的miR-223表达分别增加1300倍和600倍。3.与WT小鼠比较,TG小鼠HW/BW明显增加;WGA染色显示,TG小鼠心肌细胞明显增大;Masson染色显示,TG小鼠心脏无纤维化;RT-PCR结果显示,TG小鼠心脏纤维化基因标记物(Col I,Col III和CTGF)和病理性心脏肥大标记物(ANP,BNP,β-MHC和α-SKA)没有变化;血压测量结果显示,TG小鼠血压没有变化;超声结果,TG小鼠心脏IVSd、IVSs、EF、FS显著增加;TG小鼠运动持续时间明显延长。4.分离培养的NRCM,与Ad.GFP转染组比较,Ad.miR-223转染后24小时miR-223表达增加3.4倍,但没有对细胞大小产生影响;转染后48小时,miR-223增加71倍,而且细胞增大1.5倍。5.RNAseq结果显示,与WT比较,miR-223 TG小鼠心脏中81个基因表达上调,27个基因表达下调。RT-PCR验证了其中11个基因,结果与RNAseq基本一致。与Ad.GFP转染组比较,Ad.miR-223转染后24小时,NRCM中Postn和Rxfp1升高,Egln3降低,与TG心脏基因表达结果一致;转染后48小时,Atf3,Akip1,Ndrg4和Postn表达增加,而Egln3和Csq2表达降低,与TG心脏基因表达结果相似。6.Western blot结果显示,与Ad.GFP转染组比较,Ad.miR-223转染后24小时及48小时,Thr308和Ser473两个位点的磷酸化Akt水平均表达增高,且Akt磷酸化可被其特异性抑制剂MK2206抑制,同时细胞增大被抑制。7.荧光素酶报告显示,ACVR2a和FBXW7的3’-UTR包含代表mi R-223靶点的结合模板,是miR-223的靶基因。8.Western blot结果显示,miR-223过表达的NRCM和miR-223 TG小鼠心脏组织中ACVR2a、FBXW7及Egln3表达降低,Hif-1α和Postn的表达增加。结论:1.4周踏车运动训练诱导的生理性心脏肥大小鼠,心脏组织中miR-223表达增加。2.小鼠心脏及NRCM,miR-223过表达均可诱导生理性心肌肥大,且这种肥大是通过Akt磷酸化介导的。3.miR-223过表达通过FBXW7-Hif-1α-Postn和ACVR2a-Egln3-Hif-1α两个信号通路诱导了生理性心脏肥大。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R54
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 马为;;说说“心脏肥大”[J];祝您健康;2015年09期
2 刘冠楠;陈钢;;运动性与病理性心脏肥大[J];沈阳体育学院学报;2014年02期
3 余国膺;离体及体内实验均反映heme oxygemase-1抑制AngⅡ造成的心脏肥大[J];中国介入心脏病学杂志;2004年05期
4 刘庆增;;利尿剂引起心脏肥大患者猝死[J];中国药学杂志;1986年12期
5 王月容;;心脏肥大怎么回事[J];大家健康;2015年06期
6 邹云增;牛玉宏;;压力超负荷引起心脏肥大的机理[J];中国临床医学;2006年01期
7 余国膺;一种蛋白有可能防止心脏肥大[J];中国慢性病预防与控制;2005年04期
8 江欣;;雌激素对预防心脏肥大起重要作用[J];国外医学情报;2003年06期
9 郭伟;梁远红;靳立军;;心脏肥大细胞与心肌梗死后心室重构[J];国际心血管病杂志;2011年01期
10 马沛然;小儿心脏肥大的心电图诊断标准[J];山东医药;1980年07期
相关会议论文 前8条
1 王先梅;杨丽霞;郭传明;齐峰;石燕昆;赵颖;魏玲;王燕;;心肌肥厚患者心脏肥大细胞的改变及意义[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年
2 祁永梅;常芸;;运动性心脏肥大发生过程中生长因子IGF-Ⅱ基因的表达[A];2002年第9届全国运动医学学术会议论文摘要汇编[C];2002年
3 胡亚哲;程邦昌;王和平;扈盛;;运动性心脏肥大心肌细胞超微结构改变及意义[A];第4届全国青年体育科学学术会议论文摘要汇编[C];2005年
4 肖晗;吕志珍;马晓伟;韩启德;张幼怡;;AMPK激活可改善小鼠压力负荷引起的心脏肥大[A];第六届海峡两岸心血管科学研讨会论文摘要集[C];2007年
5 常波;董宏伟;衣雪洁;;运动性和高血压性心脏肥大心肌间质胶原网络重塑及其对左心室功能的影响[A];第九届全国体育科学大会论文摘要汇编(4)[C];2011年
6 杨青;梁振;段继诚;张维冰;张玉奎;;HPLC-UV对人组织激态释放酶的测定方法研究[A];第十二届全国光散射学术会议论文摘要集[C];2003年
7 陈蓉华;阮祥友;;Crohn病并发急性肠穿孔致感染性休克死亡1例[A];全国第七次法医学术交流会论文摘要集[C];2004年
8 许岁生;陈鹏;;自发性右心室破裂1例[A];全国第七次法医学术交流会论文摘要集[C];2004年
相关重要报纸文章 前4条
1 实习生 彭博 本报记者 张巍 叶勇;60年间,人口平均预期寿命延长42.57岁[N];哈尔滨日报;2009年
2 本报记者 马振华;不辱使命 勇于奉献[N];西藏日报;2003年
3 孙国瑞;杰南技术公司的专利分布[N];中国知识产权报;2005年
4 李雪;小儿病毒性心肌炎的诊断[N];农村医药报（汉）;2007年
相关博士学位论文 前4条
1 杨李旺;microRNA-223激活Akt通路在生理性心脏肥大中的作用[D];山西医科大学;2018年
2 马智超;microRNAs调控运动性心脏肥大相关信号通路的研究[D];扬州大学;2013年
3 施凯耀;对JAK2V617F突变所导致的骨髓增生性疾病的小鼠心脏肥大的研究[D];吉林大学;2014年
4 王耀晟;异常温度刺激影响心脏疾病的Bim相关机制及干细胞移植干预[D];南昌大学;2010年
相关硕士学位论文 前1条
1 李辉;心脏肥大细胞及TLR4在小鼠病毒性心肌炎发病机制中的作用[D];中南大学;2013年
，
本文编号：
2660249
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xxg/2660249.html
