CNP抵制Ang Ⅱ诱导心房连接蛋白失调的作用机制研究

发布时间：2020-05-21 03:21

【摘要】：目的:C型钠尿肽(C-type natriureticpeptid,CNP)是钠尿肽家族成员之一。有研究表明,CNP对心肌细胞具有抗肥大和纤维化的作用。然而,CNP对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导连接蛋白失调的作用尚不清楚。本研究利用离体搏动的大鼠心房研究CNP对Ang Ⅱ诱导心房肌组织连接蛋白失调的作用及其机制。方法:采用大鼠离体搏动的心房灌流装置,选用AngⅡ制备心房肌连接蛋白失调模型,并用CNP干预模型,然后利用蛋白印迹技术(western blot,WB)检测连接蛋白失调相关蛋白表达变化。结果:过量的Ang Ⅱ显著上调核转录因子NF-κB和AP-1,激活转化生长因子-β1(growth factor-beta 1,TGF-β1),从而增加胶原蛋白 Ⅰ(CollagenⅠ)和基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinases,MMP2)的表达,最终导致心肌纤维化和连接蛋白40(Connexin40,Cx40)及Cx43的显著下调。而CNP可完全阻断AngⅡ对核转录因子、TGF-β1、Collagen Ⅰ、MMP2、Cx40及Cx43表达的作用,并伴有腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的明显激活。CNP的这种作用可被KT5823(protein kinase G,PKG的抑制剂)和百日咳毒素(pertussis toxin;natriuretic peptide C receptor,NPR-C 的抑制剂)所阻断。结论:CNP可通过NPR-B和NPR-C激活AMPK信号通路,从而抵制Ang Ⅱ诱导的心房肌纤维化和连接蛋白表达失调的作用。表明,CNP-NPR-AMPK信号通路有望成为干预心肌连接蛋白失调性疾病的治疗策略。
【图文】：

示意图,转印,蛋白免疫印迹

延边大学硕士学位论文逦实验材料与方法逡逑图２．心房灌流过程示意图逡逑２．５．３蛋白免疫印迹分析逡逑２．５．３．１实验原理逡逑蛋白免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ，邋ＷＢ）实验是将电泳分离后的细胞或组逡逑织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物ＰＶＤＦ膜上。以固相载体上的蛋白逡逑质或多肽作为抗原，与对应的抗体（一抗）起免疫反应，再与酶或同位素逡逑标记的第二抗体起反应，，经过底物显色以检测电泳分离的特异性目的基逡逑因表达的蛋白成分。逡逑２＿５．３．２总蛋白的提取逡逑将置于－８０邋°Ｃ条件保存的心房肌组织取出，用眼科剪去除多余组织，逡逑置于含有裂解液（ＲＩＰＡ邋３００ｐｌ＋ＰＭＳＦ邋３＾１）的高温灭菌的ＥＰ管中，剪碎，逡逑低温下匀浆数次（确保每次匀浆的时间、速度和次数都一致），以上操作逡逑均应保证在冰上进行，且操作需快速完成。随后以１５０００邋ｒｐｍ速度在４邋°Ｃ逡逑条件下离心３次
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541

【参考文献】