ox-LDL对内皮细胞脂噬的影响

发布时间：2020-05-21 09:29

【摘要】：目的:研究ox-LDL对内皮细胞脂噬的影响,为保护内皮细胞、AS性心血管疾病的预防与治疗提供理论依据。方法:ox-LDL孵育内皮细胞6 h、12 h、24 h、48 h。MTT法检测内皮细胞活性。油红O染色的方法分析内皮细胞的脂质水平。Western blot法分析LC3-II/LC3-I,p62,LAMP1蛋白的表达。透射电镜观察内皮细胞脂噬泡的形成,免疫荧光共定位实验观察LC3与Bodipy共定位及LAMP1与Bodipy共定位情况。结果:1.MTT结果显示,和Control组比较,25μg/m L的ox-LDL作用6h、12 h、24 h、48 h,细胞活性未受影响;50μg/m L的ox-LDL作用48h能抑制细胞活性;100μg/m L的ox-LDL作用12 h、24 h、48 h能显著抑制细胞活性,100μg/m L的ox-LDL对细胞活性影响最大。2.油红O染色结果显示,与Control组比较,ox-LDL作用ECs 6 h,脂滴明显减少;ox-LDL作用ECs 24 h和48 h,脂滴蓄积明显增加。3.透射电镜观察发现,与Control组相比,ox-LDL作用6 h,细胞质内脂噬泡(自噬泡内包裹着脂滴)增多,ox-LDL作用24 h和48 h脂噬泡减少;并且ox-LDL作用48 h细胞内出现大量的空泡。4.Western blot结果显示,与Control组比较,ox-LDL处理内皮细胞6 h,LC3-II/LC3-I及LAMP1蛋白表达增高,p62蛋白表达降低;ox-LDL处理内皮细胞24 h,LAMP1蛋白表达降低,p62蛋白表达升高,并且ox-LDL处理内皮细胞48 h,LC3-II/LC3-I,LAMP1蛋白表达降低,p62蛋白表达升高。5.免疫荧光共定位结果显示,与Control组比较,ox-LDL处理内皮细胞6h,Bodipy与LC3、Bodipy与LAMP1均发生大量共定位现象,ox-LDL处理内皮细胞24 h和48 h,Bodipy与LC3、Bodipy与LAMP1均发生少量共定位现象。结论:ox-LDL作用内皮细胞6 h,通过增强脂噬改善脂质沉积;而ox-LDL作用内皮细胞24 h和48 h则引起脂质蓄积,可能与脂噬减弱有关。ox-LDL作用6 h诱导的内皮脂噬增强可能与自噬/溶酶体通路对ox-LDL的降解作用增强有关,ox-LDL作用24 h和48 h脂噬减弱与自噬/溶酶体通路对ox-LDL的降解作用减弱有关。
【图文】：

第 3 章 实验结果.1 ox-LDL 抑制内皮细胞的活性以不同浓度的 ox-LDL 处理 ECs 不同时间 (6 h、12 h、24 h、48 h)，，MT显示，和 Control 组比较，浓度为 25 μg/mL 的 ox-LDL 作用 6 h、12 h、24 h 细胞活性未受影响；浓度为 50 μg/mL 的 ox-LDL 作用 48 小时能抑制细胞 (P < 0.05)； 浓度为 100 μg/mL 的 ox-LDL 作用 12 h、24 h、48 h 能显著抑胞活性 (P < 0.05)，100 μg/mL 的 ox-LDL 对细胞活性影响最大 (见图 3.1)。选择 100 μg/mL 的 ox-LDL 作用内皮细胞 6 h、12 h、24 h、48 h 进行后续实

与 Control 组比较，ox-LDL 处理内皮细胞 6 小时，自噬标记蛋白LC3-II/LC3-I 增高 (P < 0.05)； ox-LDL 处理内皮细胞 12 小时和 24 小时，LC3-II/LC3-I 无明显变化；而 ox-LDL 处理内皮细胞 48 小时，LC3-II/LC3-I 降低(P < 0.05)，自噬减弱；提示 ox-LDL 处理 6 小时 ECs 自噬增强，随着 ox-LDL 作用时间延长，ox-LDL 对 ECs 的损伤超过细胞的自我修复能力时，48 小时自噬减弱（见图 3.2）。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R54

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 龙石银;黄良珠;乔新惠;张彩平;高细强;佟丽;田英;;二苯乙烯苷对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的影响[J];中国动脉硬化杂志;2011年03期

2 朱冰坡,范利;动脉粥样硬化的抗氧化治疗研究进展[J];中国老年学杂志;2005年04期

本文编号：2674068