NLRP3炎症小体通过影响心脏Nav1.5通道蛋白增加压力负荷性心衰室性心律失常易感性

发布时间：2020-05-21 20:27

【摘要】：目的:本实验通过腹主动脉缩窄术(AAC)构建压力负荷性心衰大鼠模型,旨在研究NLRP3炎症小体通过对白介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子β(TGF-β)等下游因子的调控,影响心肌细胞内Na+通道(Nav1.5)的表达,从而导致室性心律失常易感性发生改变及其作用机制。方法:使用随机数字表的方法将大鼠分为手术组30只,假手术组20只。予以腹主动脉缩窄术,术后8周,余下34只大鼠分为sham组(假手术组),AAC组(腹主动脉缩窄手术组),sham+vehicle组(假手术+空载病毒组),AAC+vehicle组(腹主动脉缩窄术+空载病毒组),sham+siRNA(假手术+siRNA病毒组),AAC+siRNA组(腹主动脉缩窄术+siRNA组)六组,并按照组别为大鼠注射对应慢病毒。四周后,对大鼠进行心脏彩色超声、血流动力学等检测后处死取心肌。使用Western Blot、RT-PCR、免疫荧光等方法检测大鼠心室肌细胞内NLRP3炎症小体、IL-β、TGF-β、Caspase-1、ASC、Nav1.5等因子在蛋白和基因层面的表达情况。结果:1.与假手术组大鼠(sham组、sham+vehicle组与sham+siRNA组)相比,手术组(AAC组、AAC+vehicle组与AAC+siRNA组)大鼠鼠LVW/BW、HWI、LVPWd、SBP、DBP、LVEDP、LVESP、+dP/dt max、-dP/dt max、均较之升高,BW、LVEF、LVFS、E/A值均较之降低。差异具有统计学意义。(P0.05)。sham+vehicle组与sham组,AAC+vehicle组与AAC组,sham+siRNA组与sham组,AAC+siRNA组和AAC组相比,各项指标差异均无统计学意义。2.与假手术组大鼠(sham组、sham+vehicle组与sham+siRNA组)相比,手术组(AAC组、AAC+vehicle组与AAC+siRNA组)大鼠BNP水平均较之升高,差异具有统计学意义(P0.05)。AAC+siRNA组和AAC组相比,BNP水平降低,差异具有统计学意义(P0.05)。sham+vehicle组与sham组,AAC+vehicle组与AAC组,sham+siRNA组与sham组,各项指标差异均无统计学意义。3.sham组大鼠心肌细胞大小正常,心肌组织间无炎性细胞浸润,胶原纤维少。AAC组大鼠心肌细胞肥大,组织间炎性细胞浸润,结缔组织明显增加,胶原纤维增加,血管周围更为明显;AAC+siRNA组大鼠心肌细胞肥大,组织间炎性细胞浸润,结缔组织及胶原纤维增加情况较AAC组减轻。4.AAC组大鼠心肌细胞ROS荧光强度明显高于sham组,AAC+siRNA组大鼠心肌细胞ROS荧光强度高于sham组但低于AAC组。5.与假手术组大鼠(sham组、sham+vehicle组与sham+siRNA组)相比,手术组(AAC组、AAC+vehicle组与AAC+siRNA组)大鼠心律失常诱发率均较之升高,差异具有统计学意义(P0.05)。AAC+siRNA组和AAC组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。sham+vehicle组与sham组,AAC+vehicle组与AAC组,sham+siRNA组与sham组相比,指标差异均无统计学意义。6.与假手术组大鼠(sham组、sham+vehicle组与sham+siRNA组)相比,手术组(AAC组、AAC+vehicle组与AAC+siRNA组)大鼠NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TGF-β、ASC蛋白表达量均较之升高,Nav1.5蛋白表达量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。sham+vehicle组与sham组,AAC+vehicle组与AAC组,NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TGF-β、ASC指标差异均无统计学意义。对于sham+siRNA组与sham组相比,AAC+siRNA组相较于AAC组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TGF-β、ASC均降低,Nav1.5升高差异具有统计学意义(P0.05)。7.与假手术组大鼠(sham组、sham+vehicle组与sham+siRNA组)相比,手术组(AAC组、AAC+vehicle组与AAC+siRNA组)大鼠NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TGF-β、ASC蛋白表达量均较之升高,Nav1.5蛋白表达量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。sham+vehicle组与sham组,AAC+vehicle组与AAC组,NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TGF-β、ASC指标差异均无统计学意义。对于sham+siRNA组与sham组相比,AAC+siRNA组相较于AAC组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TGF-β、ASC均降低,Nav1.5升高差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.外周压力负荷型心衰可导致NLRP3炎症小体表达增加,从而引起其下游的IL-β、TGF-β、Caspase-1、ASC表达增加。并能导致心肌细胞Nav1.5通道减少。2.减少NLRP3炎症小体的表达,可导致心室肌Nav1.5通道蛋白表达回升,并降低压力负荷型心衰室性心律失常的易感性。3.NLRP3炎症小体短期表达减少对心衰心脏血流动力学、收缩、舒张能力无明显改善。4.心衰所导致室性心律失常易感性增加可能与纤维化相关。
【图文】：

31NLRP3炎症小体通过影响心脏Nav1.5通道蛋白增加压力负荷性心衰室性心律失常易感性 2019届 硕士学位论文图2-1 注射附带绿色荧光蛋白慢病毒四周后大鼠心肌冰冻切片。Figure 2-1 Frozen sections of rat myocardium four weeks after injection with lentivirus.2 AAC组与sham组心功能数据比较2.1心肌质量指数与sham 组大鼠相比，AAC手术组大鼠体重降低，左心室重量与体重比及心脏质量指数均较之升高，差异具有统计学意义。（*P<0.05）。表2-2 AAC与 sham组大鼠建模12周后心肌质量指数比较（ x±s）组别 BW（g） LVW/BW（mg/g） HWI（mg/g）sham 319.0±6.169 2.533±0.085 3.425±0.2137AAC 259.6±3.081* 4.531±0.234* 4.472±0.2951*t 值 21.50 22.54 7.724P 值 < 0.0001 < 0.0001 < 0.0001与 sham 组比较，*P＜0.05；图2-2 AAC 与 sham 组大鼠建模 12 周体重比较。Figure 2-2 Body weight comparison of AAC and sham group at 12 weeks after modeling.

m组心功能数据比较数大鼠相比，AAC手术组大鼠体重降低，左心均较之升高，，差异具有统计学意义。（*P-2 AAC与 sham组大鼠建模12周后心肌质量指数比较（ xLVW/BW（mg/g） HWI（mg9 2.533±0.085 3.425±0.21* 4.531±0.234* 4.472±0.222.54 7.724< 0.0001 < 0.00010.05；
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R541.6;R541.7

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本文编号：2674853