高糖对H9C2心肌细胞miR-26表达的影响及其机制研究

发布时间：2020-05-22 00:39

【摘要】：目的:糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病的并发症之一,mi RNAs的改变与DCM的发生发展密切相关,通过研究高浓度葡萄糖干预的H9C2心肌细胞的增殖活性、凋亡及细胞内mi R-26a/b表达的变化,进一步过表达/沉默mi R-26a后探索高浓度葡萄糖干预的心肌细胞增殖活性、凋亡改变,从而揭示mi R-26与DCM的发生发展之间的关系。方法:采用CCK-8法检测不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/l,15 mmol/l,25 mmol/l,35mmol/l)干预H9C2心肌细胞不同时间后细胞增殖活性的变化;采用流式细胞仪技术检测不同浓度葡萄糖干预H9C2心肌细胞凋亡率的变化;采用RT-PCR法检测不同浓度葡萄糖干预的H9C2心肌细胞内mi R-26a/b的水平、高浓度葡萄糖(25mmol/l)干预H9C2心肌细胞不同时间后mi R-26a/b表达水平的变化及C57BL/6J小鼠和ob/ob小鼠心脏、脂肪、肝等组织中mi R-26b水平;采用CCK-8法检测mi R-26a过表达及沉默后高浓度葡萄糖(25 mmol/l)干预下的H9C2心肌细胞增殖活性的改变;采用流式细胞仪技术检测mi R-26a过表达及沉默后高浓度葡萄糖(25mmol/l)干预下的H9C2心肌细胞凋亡率的变化。结果:1.CCK-8法检测不同浓度葡萄糖干预的H9C2心肌细胞增殖活性结果表明:与5.5mmol/l葡萄糖组比较,15 mmol/l、25 mmol/l及35 mmol/l 3组细胞增殖活性均显著增高(p0.05);2.流式细胞仪技术检测细胞凋亡结果表明:与5.5 mmol/l葡萄糖组相比,15mmol/l、25 mmol/l及35 mmol/l组的心肌细胞凋亡率均显著下降(p0.05);3.RT-PCR法检测不同浓度葡萄糖干预的H9C2心肌细胞内mi R-26a/b水平结果表明:高浓度葡萄糖可下调H9C2心肌细胞内mi R-26a/b的表达,并随着干预时间的延长,下调更加显著(p0.05);4.在C57BL/6J小鼠心脏组织中mi R-26b表达水平最高,与C57BL/6J小鼠相比,ob/ob小鼠心脏及白色脂肪组织中mi R-26b水平明显降低(p0.05);5.mi R-26a过表达可抑制高浓度葡萄糖干预的心肌细胞的增殖活性(p0.05),沉默mi R-26a可增强H9C2心肌细胞增殖活性(p0.05);mi R-26a过表达及沉默均对H9C2心肌细胞凋亡状态无明显影响(p0.05)。结论:1.高浓度葡萄糖可促进心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,引起mi R-26a/b表达水平下调;2.miR-26a可影响心肌细胞增殖,并不影响细胞凋亡;3.miR-26可能通过调节心肌细胞增殖过程参与DCM的发生发展。
【图文】：

心肌细胞增殖,葡萄糖

1 不同浓度葡萄糖组干预不同时间 H9C2 心肌细胞增殖活性的比较The proliferative activity of H9C2 cardiomyocytes after treated with diconcentrations of glucose for different hours葡萄糖对心肌细胞凋亡的影响浓度葡萄糖干预 H9C2 心肌细胞后,为了验证不同浓度葡萄胞凋亡状态的影响，现采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡状与 5.5 mmol/l 葡萄糖组相比，15 mmol/l、25 mmol/l 及 35细胞凋亡率均显著下降（p<0.001）。

葡萄糖,流式,心肌细胞凋亡,细胞凋亡

与 5.5 mmol/L 葡萄糖组相比，，**** p ＜0.0001, *** p ＜0.001浓度葡萄糖干预对 H9C2 心肌细胞凋亡的影响（A：不同浓度葡萄糖干预对 H9C亡率的比较；B：空染阴性对照细胞凋亡流式图；C-F：5.5 mmol/l 葡萄糖组, 15 mm葡萄糖组, 25 mmol/l 葡萄糖组, 35 mmol/l 葡萄糖组细胞凋亡流式图） The apoptosis ratio of H9C2 cardiomyocytes after treated with different concentrationA：Apoptosis ratio of H9C2 cardiomyocytes after treated with different concentrationB：Negative control cell without staining; C-F: 5.5mmol/l Glu group, 15mmol/l Glu gr25mmol/l Glu group, 35mmol/l Glu group）同浓度葡萄糖对心肌细胞中 miR-26a 表达的影响用不同浓度葡萄糖干预 H9C2 心肌细胞 48 h后,为了验证不同浓度葡萄糖iR-26a 表达水平的变化，现采用 RT-PCR 法检测各组细胞内 miR-26a 水图 3 所见：与 5.5 mmol/l 葡萄糖组相比，25 mmol/l 及 35 mmol/l 葡萄糖 miR-26a 表达水平下调，差异有统计学意义（p<0.05），而 15 mmol/l 葡胞内 miR-26a 有下调趋势，差异无统计学意义（p>0.05）。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2;R542.2

【参考文献】