Linc00152吸附miR-4767调节内皮细胞功能

发布时间：2020-05-22 16:27

【摘要】：背景越来越多的研究证据表明,长链非编码RNA(lncRNA)参与基因表达调控的几乎所有方面,包括表观遗传学,转录和转录后,参与许多生理和病理条件下的生物学过程,如细胞生长和运动,分化和重编程以及应激反应。在转录和转录后水平上,基因表达的精细调节是哺乳动物细胞对内外刺激的反应所必需的。通过在转录因子启动子复合物组成的交替实现转录调控,转录后调控是通过RNA剪接的选择性剪接、mRNA的稳定性和转运改变来介导的。LncRNA基因的精细调节,是最普遍的和功能不同的调节器。它们可以在相对低的表达水平上发挥作用,它们的调节可以由各种刺激过程中的刺激引起,包括血管损伤和重塑。血管内皮细胞(VEC)功能障碍在许多心血管疾病如动脉硬化,动脉炎,血栓和斑块侵蚀的发病机制中是重要的。参与VEC功能调节的蛋白质编码基因已经得到较好的研究。LncRNA在调节动脉粥样硬化和其他心血管疾病中的作用引起了人们的关注,但是lncRNA在VEC功能中的确切作用还不清楚。Linc00152已在多种癌组织中表达上调,促进细胞增殖和凋亡转移,并抑制细胞凋亡。然而,它在非癌症生物学过程中的作用是未知的。最近的研究表明,linc00152可能在循环系统中表达,并且对生化应激反应,提示其功能可能不限于致癌作用。目的探讨研究了基因间lncRNA-linc00152在静脉内皮细胞(VEC)的凋亡和转移中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在配有10%胎牛血清(FBS),100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)。将细胞放在37℃,5%CO2培养箱中培育。将HUVEC在密度为每孔105个孔的12孔培养板中传代培养。在细胞达到50%汇合时,将ox-LDL(溶于含有0.08μ MEDTA-Na2的PBS)以50 μ g/ml,100 μ g/ml,150 μ g/ml和200 μ g/ml的最终浓度加入到培养细胞中。作为对照,将含有0.08μM MEDTA-Na2的等体积PBS与细胞一起培育。通过载体转染,定量逆转录PCR(qRT-PCR),蛋白质印迹,荧光素酶构建体和活性检测方法检测细胞中linc00152 mRNA的表达。统计采用SPSS统计软件23.0进行统计。通过单因素方差分析和Dunnett's检验评估多重比较。如果P0.05,则组间差异被认为是统计学有差异。结果首先,研究发现氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理的人类脐静脉血管内皮细胞中linc00152以剂量和时间依赖性的方式下调(其中oxLDL氧化低密度脂蛋白是血管内皮功能障碍起始和进展中典型的促炎因子)。其次,功能获得和功能缺失实验表明ox-LDL处理的HUVEC中linc00152明显抑制细胞凋亡和促进转移。然后我们通过结合miR-4767,发现linc00152正向调节Bc12L12和EGFR蛋白的表达。此外,阻断mir-4767获得的敲减linc00152造成Bc12L12和EGFR表达减少,从而改变细胞的凋亡和迁移。结论Linc00152有可作为改善血管内皮功能和治疗一些心血管疾病的潜在靶点的作用。
【图文】：

迁移能力,过表达,细胞凋亡,转染

（ｓｉＬｉｎｃ００１５２）的特异性邋ｓｉＲＮＡ。用邋ｐｃＤＮＡ３．１－ｌｉｎｃ００１５２（浓度为邋０．５ｎｇ／ｍｌ，ｌｐｇ／ｍｌ逡逑或邋２ｐｇ／ｍｌ）或邋ｓｉＬｉｎｃ００１５２邋（２０ｎＭ，，４０ｎＭ邋或邋８０ｎＭ）转染邋ＨＵＶＥＣ。通过实时逡逑定量ＰＣＲ证实ｌｉｎｃ００１５２过表达和ｌｉｎｃ００１５２敲减时发挥的作用（图２Ａ和２Ｂ邋）。逡逑然后，用邋ｌｐｇ／ｍｌｐｃＤＮＡ３．１－ｌｉｎｃ００１５２邋或邋４０ｎＭｓｉＬｉｎｃ００１５２邋转染邋ＨＵＶＥＣ。用逡逑１５０ｐｇ／ｍｌ邋ｏｘＬＤＬ处理或不加１５0ｎｇ／ｍｌ邋ｏｘＬＤＬ处理ＨＵＶＥＣｓ后，分别检测细胞逡逑凋亡和迁移。在ｏｘ－ＬＤＬ处理的ＨＵＶＥＣ中，ｌｉｎｃ００１５２负调控细胞凋亡（Ｃ）并逡逑正向调节迁移。Ｌｉｎｃ００１５２过度表达导致没有ｏｘ－ＬＤＬ处理的ＨＵＶＥＣｓ中细胞凋逡逑亡减少，同时在１２ｈ和２４ｈ明显抑制细胞凋亡（图２Ｃ）。Ｌｉｎｃ００１５２敲减时显著逡逑增加了邋ｏｘ－ＬＤＬ处理的和ｏｘ－ＬＤＬ未处理的ＨＵＶＥＣｓ中的细胞凋亡（图２Ｃ）。此逡逑外，ｌｉｎｃ００１５２过表达明显增加了邋ＨＵＶＥＣｓ的迁移能力，并且ｌｉｎｃ００１５２敲减使逡逑ＨＵＶＥＣｓ迁移能力降低了（图２Ｄ）。逡逑１７逡逑

摩尔,位点

（邋ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆｏ．ｕｎｉ－ｐｌｏｖｄｉｖ．ｂｇ／ｍｉｃｒｏｉｎｓｐｅｃｔｏｒ／邋）邋和邋ＲＮＡｈｙｂｒｉｄ逡逑（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｂｉｓｅｒｖ．ｔｅｃｈｆａｋ．ｕｎｉ－ｂｉｅｌｅｆｅｌｄ．ｄｅ／ｍａｈｙｂｒｉｄ／）。结果显不邋ｍｉＲ－４７６７邋具有结合逡逑位点（图３Ａ），结合自由能非常低；（－３２．６千卡／摩尔，补充图１）。逡逑Ｔａｒｇｅｔ：邋ＭＪ２４２０４．１逡逑ｌｅｎｇｔｈ：邋８２８逡逑ＩｉＲＳＡ：邋ＭＪ３９９２４．！逡逑ｌｅｎｇｔｈ：邋２３逦科逡逑ｍｆｅ：邋－３２．６邋ｋｃａｌ／ｍｏｌ逦ｆＪ｜逡逑ｐ－ｖａｌｕｅ：邋１．０邋酬邋Ｇｄｅ＋ＧＤ逦Ｐ１逡逑Ｐｏｓｉｔｉｏｎ：邋１１３逡逑ｔａｒｇｅｔ邋５’邋Ａ逦Ｕ邋ＣＣＧＵ邋Ｃ邋３’逦ｄＪ逡逑ＧＣＧＧＵＧＣＣ邋ＧＡＧＣ逦ＧＣＣＵＧＵ逡逑ＣＧＣＣＧ邋ＣＧＧ邋ＣＵＣＧ逦ＣＧＧＧＣＧ逦Ｃ＼逦．邋ｒ逡逑＿＂，Ｃ邋Ｃ邋ＵＣ逦Ｃ５－逡逑ｎｆｅ：邋－３２．６邋ｋｃａｌ／ｎｏｌ逦－邋＂Ｗ逡逑补充图１：邋ｍｉＲ－
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R54

【参考文献】