免疫蛋白酶体β5i在小鼠下肢缺血中的调节作用及机制研究

发布时间：2020-05-31 05:45

【摘要】：研究背景:动脉粥样硬化性下肢缺血是老龄化社会的常见病,多发病,下肢缺血性疾病是严重威胁人们身体健康的一类疾病,轻者出现间歇性跋行,影响正常的工作和学习,重者截肢,甚至威胁人的生命。血管新生和炎症反应为下肢缺血患者转归的重要因素,免疫蛋白酶体对T细胞的分化、炎性因子分泌等过程具有重要的调节作用,以β5i亚单位作用为主,但β5i亚单位是否参与了下肢缺血疾病的血管新生,目前尚无报道。目的:明确免疫蛋白酶体亚单位β5i在小鼠下肢缺血中的调节作用及机制研究。实验方法:取雄性ApoE-/-小鼠制备下肢缺血模型。实验分为4组:ApoE-/-组(ApoE-/-),ApoE-/-手术组(ApoE-/--OP),β5i 基因敲除的 ApoE-/-组(DKO 组),β5i基因敲除的ApoE-/-手术组(DKO-OP组)。激光超声多普勒进行手术成功率及术后血流灌注的监测。Western Blot方法分析β5i在下肢缺血组织中的表达水平。并通过HE染色观察各组小鼠炎症变化和血管重塑情况。Western Blot方法测定肌肉内VEGF的表达。免疫组织化学测定侧枝血管新生。结果:1、股动脉结扎是制备小鼠下肢缺血性模型的有效方法;2、ApoE-/--OP组组织中免疫亚单位β5i表达及活性较ApoE-/-组增加;3、激光多普勒监测提示DKO-OP组较ApoE-/--OP组缺血下肢血流灌注的恢复程度明显增加;4、HE染色发现DKO-OP组较ApoE-/--OP组缺血下肢肌肉的损伤程度低,血管重塑能力强;5、Western Blot方法测定DKO-OP组VEGF的表达明显高于ApoE-/--OP组;6、免疫组织化学测定提示DKO-OP组缺血下肢肌肉内血管新生明显多于ApoE-/--OP组。结论:本研究表明免疫蛋白酶体亚单位β5i通过增加了缺血下肢的血管新生改善了小鼠下肢的缺血状况,进一步研究表明免疫蛋白酶体亚单位β5i是通过调节VEGF基因促进了血管新生。通过本研究,初步明确了 β5i参与下肢缺血疾病的病理生理机制,为药物治疗下肢缺血提供新的参考靶点。
【图文】：

小鼠,有效方法,远端,免疫蛋白

雄性ＡｐｏＥ＋小鼠，高脂饲养后取１２周龄小鼠，依据文献［２６］制逡逑。逡逑是制备小鼠下肢缺血性模型的有效方法。实验分为２组（每组逡逑、ＡｐｏＥｖ￥术组。Ａ．股总动脉及股动脉远端远端（近胭动脉处）逡逑在两组双结之间剪断。Ｂ，，小鼠术后恢复ｌｈ后，进行激光多普勒逡逑定下肢缺血情况。Ｃ．统计两组术前及术后下肢血流灌注率的情逡逑并于术前、术后３天及７天取腓肠肌，检测免疫蛋白酶体亚单位逡逑。逡逑ｉｏｎ邋ｏｆ邋ｆｅｍｏｒａｌ邋ａｒｔｅｒｙ邋ｉｓ邋ａｎ邋ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ｔｏ逡逑ｍｉｃ邋ｍｏｄｅｌ邋ｏｆ邋ｌｏｗｅｒ邋ｅｘｔｒｅｍｉｔｙ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ．邋Ｔｈｅ逡逑ｉｖｉｄｅｄ邋ｉｎｔｏ邋ｔｗｏ邋ｇｒｏｕｐｓ邋（ｎ邋＝邋１０）：邋ＡｐｏＥ—＂ｇｒｏｕｐ邋（ｎ邋＝邋１０）：逡逑（ｎ邋＝邋１０）．邋Ａ．邋Ｔｈｅ邋ｃｏｍｍｏｎ邋ｆｅｍｏｒａｌ邋ａｒｔｅｒｙ邋ａｎｄ邋ｐｒｏｘｉｍａｌ逡逑ｅｒｅ邋ｌｉｇａｔｅｄ邋ｂｙ邋ｄｏｕｂｌｅ邋ｋｎｏｔｓ邋ｌｉｇａｔｉｏｎ．邋Ｂｅｔｗｅｅｎ邋ｔｈｅ邋ｄｏｕｂｌｅ逡逑２１逡逑

下肢,程度,组间,对照组

图２．激光多普勒血流检测提示ＤＫＯ－ＯＰ组较Ａｐ0Ｅ＿／＿－恢复程度明显增加。Ａ．邋０Ｄ各组间无统计学差异。Ｂ．邋３Ｄ邋敲除的ＡｐｏＥ＋手术组统计学差异（＊Ｐ＜０．０５）。Ｃ．邋７Ｄ邋（术组较ＡｐｏＥ＋手术组存在明显的统计学差异（＊＊Ｐ＜０．０１）手术组较对照组下肢血流灌注明显增加。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．邋Ｌａｓｅｒ邋Ｄｏｐｐｌｅｒ邋ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｔｉｓｃｈｅｍｉｃ邋ｂｌｏｏｄ邋ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋丨ｏｗｅｒ邋ｌｉｍｂｓｇｒｏｕｐ邋ｗａｓ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋ｉｎｃｒｅａｓｅｄ邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｔＡ．邋ＯＤ邋Ｔｈｅｒｅ邋ｗａｓ邋ｎｏ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ａｍｏｎｇ邋ｔｈｗａｓ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ｂｅｔｗｅｅｎ邋ｐ５ｉ邋ｋｎｏｃｋｏｕｔ邋ｉｎ邋ｔＡｐｏＥ－／－邋ａｎｄ邋ｏｐｅｒａｔｉｏｎ邋ｇｒｏｕｐ邋（＊Ｐ＜０．０５）邋．邋Ｃ．邋７Ｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ｂｅｔｗｅｅｎ邋（３５ｉ邋ｋｎｏｃｋｏｕｔ邋ｉｎ邋ｔｈ
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543

【参考文献】