对氧磷酶2对氧化低密度脂蛋白诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响

发布时间：2020-06-02 01:57

【摘要】：一直以来动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心脏病就是人类致伤、致残甚至致亡的头号杀手。AS性心脏病,简称冠心病(coronary heart disease,CHD),其发病机制纷繁冗杂。众所周知,内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)和氧化应激(oxidative stress,OS)均参与了其中,而氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)引起AS的病理作用已经成为共识,其已被证实可以引起培养细胞的炎症反应、OS反应和细胞损伤及凋亡。目前防止ox-LDL引起的心肌损伤的治疗方法未达理想疗效,尚需要新的临床或动物研究来填补这一未竟的领域。对氧磷酶(paraoxonase,PON)是一类抗氧化酶,PON 2是其中的一种,主要分布在内质网(endoplasmic reticulum,ER),在ER内发挥抗氧化作用。研究发现PON2基因缺陷的巨噬细胞,OS和ERS水平明显增强,而过表达PON2,可显著降低细胞OS和ERS水平。上述结果提示PON2活性与OS和ERS程度密切相关。目前关于PON2的研究多集中在肾脏、中枢神经和免疫系统,尚未进行心肌细胞的系统研究。本研究旨在通过检测PON2能否抑制ox-LDL诱导的心肌细胞程序性死亡或凋亡,探讨PON2发挥保护作用的机制。方法:利用ox-LDL干预乳鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular cells,NRVCs),并利用SOD类似物Mn(III)TBAP、e IF2α去磷酸化抑制剂Salubrinal、抗氧化酶PON2多肽提前预处理,将心肌细胞分成对照组、ox-LDL组、Salubrinal+ox-LDL组、PON2+ox-LDL组、Mn(III)TBAP+ox-LDL组。然后用MTT检测心肌细胞的活性(n=6);caspase-3/7活性试剂盒检测心肌细胞凋亡(n=6);western blot检测OS蛋白Nox2/gp91phox和p47phox,ERS凋亡蛋白caspase-12和e IF2αphox的表达及PON2蛋白的表达(n=4)。结果:与对照组比较,ox-LDL明显降低心肌细胞活性(P0.01)显著增加心肌细胞凋亡(P0.01);与ox-LDL组相比,PON2,salubrinal和Mn(Ⅲ)TBAP干预后,心肌细胞活性显著升高(P0.01),心肌细胞凋亡显著下降(P0.01)。与对照组相比,ox-LDL显著增加PON2蛋白表达(P0.05)、内质网应激蛋白e IF-2αphox(P0.01)、caspase-12(P0.01)和氧化应激蛋白Nox2/gp91phox(P0.01)、p47phox表达(P0.01);与ox-LDL组相比,PON2干预后,PON2蛋白表达明显增加(P0.05);e IF-2αphox(P0.01),caspase-12(P0.05),Nox2/gp91phox(P0.05)和p47phox(P0.05)蛋白表达明显降低;与PON2作用类似,salubrinal干预后,e IF-2αphox(P0.05)和caspase-12(P0.01)蛋白表达明显降低,Mn(Ⅲ)TBAP干预后,Nox2/gp91phox(P0.01)和p47phox(P0.01)蛋白表达明显降低,二者均显著增加PON2表达(P0.05)。结论:1.PON2可增加ox-LDL诱导的心肌细胞活性,抑制ox-LDL诱导的心肌细胞凋亡;2.PON2通过代偿性升高抑制ox-LDL引起的OS反应而减轻心肌细胞损伤;3.PON2通过代偿性升高抑制ox-LDL引起的ERS反应而减轻心肌细胞损伤。综上所述,PON2可能是能通过代偿性升高抑制OS和ERS反应从而对ox-LDL导致的心肌细胞程序性死亡或凋亡发挥保护作用。此结果有望对防治ox-LDL引起的心肌损伤提供新的理论依据。
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.4

【参考文献】