miR-29a在慢性心衰恶性心律失常中的作用及机制研究

发布时间：2020-06-10 06:07

【摘要】：慢性心衰是大多数心血管疾病的合并症,死亡率居高不下,其主要死亡原因是心力衰竭和恶性心律失常。而晚钠电流异常增加导致的恶性心律失常是慢性心衰患者死亡的重要分子机制。大量研究表明microRNA在心脏相关疾病中起重要作用,可负调控晚钠电流相关基因的表达,从而引起晚钠电流异常增强,对患者造成严重后果,本文旨在研究microRNA与慢性心衰晚钠电流的相关性。目的:应用qRT-PCR以及Western blot技术,研究慢性心衰犬犬心肌及慢性心衰病人血浆中均异常升高的miR-29a对晚钠电流相关基因SCN5A表达的影响,并探索其在慢性心衰恶性心律失常中的作用机制。方法:1.将健康犬通过右心室非同步起搏模式,起搏频率(260±10)次/min持续起搏四周构建慢性心衰犬模型(Chronic heart failure,CHF模型)。2.采用基因芯片筛选出慢性心衰犬与健康犬左心室心肌组织中表达有差异的miRNA,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证基因芯片的表达差异结果,筛选出表达有明显差异的miRNA,再通过qRT-PCR进一步验证筛选出的miRNA在慢性心衰病人与健康人的血浆中是否有明显差异,通过上述结果筛选出一个表达差异比较明显的研究目标miR-29a。3.通过靶基因预测软件(Targetscan,miRanda,miRbase)预测miR-29a的靶基因为SCN5A,其编码蛋白为Nav1.5,通过双荧光素酶报告系统进一步证明miR-29a与SCN5A之间存在结合位点,即SCN5A是miR-29a的靶基因。4.将miR-29a mimics转染犬心肌细胞(DCYC)及人心肌细胞(HCM)。通过Western blot(WB)实验验证miR-29a的过表达是否能下调靶蛋白Nav1.5的表达,并引起晚钠电流(Late Sodium Current,INaL)异常增强。结果:通过基因芯片与qRT-PCR技术筛选出一个miRNA,即在慢性心衰犬左心室与慢性心衰病人血浆中均异常升高的miR-29a;将miR-29a作为研究对象,对其进行靶基因预测发现其靶基因为SCN5A,双荧光素酶报告系统显示miR-29a的靶基因确实是SCN5A;将miR-29a mimics转染进犬及人心肌细胞,并通过WB实验证实miR-29a的过表达可以抑制SCN5A编码蛋白Nav1.5的表达。结论:miR-29a可以抑制靶基因SCN5A的表达,使Nav1.5蛋白表达量下降,从而导致晚钠电流的异常增强,进而可能导致恶性心律失常的发生。
【图文】：

图 1.1 晚钠电流示意图Fig1.1 Schematic diagram of the INaL内向复极储备电流 INa、ICaL和外向复极储备电流并保持动态平衡，，而 INaL参与了心室复极全会对病人产生严重后果。

图 1.2 慢性心衰晚钠电流增强示意图he schematic diagram of INaLenhancement in chronic heart fai（B）中的 INaL较正常心肌（A）明显增加，其复极时 INaL导致了早后除极和迟后除极极易引发恶性心律
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.6;R541.7

【参考文献】

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3 张曼;王礼琳;张进;;心脏晚钠电流——慢性心力衰竭恶性心律失常防治的新靶点[J];心血管病学进展;2015年04期

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本文编号：2705889