对氧磷酶2通过抑制JNK通路和氧化应激通路对抗氧化低密度脂蛋白诱导的乳鼠心肌细胞损伤

发布时间：2020-06-13 11:03

【摘要】：目的:对氧磷酶2(Paraoxonase 2,PON2)是对氧磷酶家族成员之一,在人类组织中广泛表达,具有抗动脉粥样硬化及抗氧化应激等作用。目前对PON2的作用机制已有大量的研究,但进一步涉及到细胞内通路的研究较少。本实验主要通过应用Western blot技术,观察P0N2是否通过抑制c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路和氧化应激通路对抗氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的乳鼠心肌细胞损伤。方法:选取1-3日内出生的SD乳鼠,雌雄不限,由河北医科大学实验动物中心提供。麻醉乳鼠,取其心脏,进行乳鼠心肌细胞培养。利用具有PON2 siRNA的重组腺病毒转染乳鼠心肌细胞使其PON2蛋白低表达。用腺病毒空载体、ox-LDL,PON2蛋白和JNK抑制剂SP6000125进行前期处理,最后乳鼠心肌细胞分组为:control组,ox-LDL组,ox-LDL+PON2蛋白组,ox-LDL+SP600125组,control AD组,ox-LDL+control AD组,PON2 siRNA组,ox-LDL+PON2 siRNA组。利用MTT法检测细胞存活率,半胱天冬酶3/7(caspase3/7)活性检测试剂盒检测细胞凋亡变化,Western blot技术检测JNK的磷酸化水平,Nox2/gp91~(phox)和PON2蛋白表达的变化。结果:1.与control组相比,ox-LDL组细胞存活率明显降低[(0.400±0.150)vs(0.654±0.153),P0.05];与ox-LDL组相比,ox-LDL+PON2蛋白组与ox-LDL+SP600125组细胞存活率明显升高[(0.560±0.200),(0.550±0.180)vs(0.400±0.150),P0.05];与ox-LDL+control AD组,ox-LDL+PON2 siRNA组细胞存活率明显降低[(0.230±0.110)vs(0.371±0.151),P0.05]。与control组相比,ox-LDL组的caspase3/7活性明显升高[(11962.33±643.41)vs(6620.5±342.01),P0.05];与ox-LDL组相比,ox-LDL+SP600125组与ox-LDL+PON2蛋白组的caspase3/7活性明显降低[(7521.80±499.80),(7462.00±402.75)vs(11962.33±643.41),P0.05];与ox-LDL+control AD组,ox-LDL+PON2 siRNA组的caspase3/7的活性明显升高[(13562.5±574.42)vs(11816.33±640.21),P0.05]。表明PON2可减少ox-LDL诱导的心肌细胞凋亡,减轻心肌细胞损伤。2.与control组相比,ox-LDL组氧化应激指标Nox2/gp91~(phox)的蛋白表达明显升高[(1.400±0.140)vs(0.540±0.230),P0.05];与ox-LDL组相比,ox-LDL+PON2蛋白组Nox2/gp91~(phox)的蛋白表达明显降低[(0.868±0.226)vs(1.400±0.140),P0.05];与ox-LDL+control AD组,ox-LDL+PON2 siRNA组的Nox2/gp91~(phox)的蛋白表达明显升高[(1.740±0.140)vs(1.396±0.140),P0.05],表明PON2可抑制ox-LDL诱导的氧化应激反应。3.用携带有PON2干扰基因的腺病毒转染乳鼠心肌细胞后,PON2的蛋白表达明显降低,表明PON2的低表达模型建立成功。与control组相比,ox-LDL组的JNK的磷酸化水平明显升高[(0.370±0.020)vs(0.150±0.020),P0.05];与ox-LDL组相比,ox-LDL+PON2的JNK的磷酸化水平明显降低[(0.204±0.096)vs(0.370±0.020),P0.05];与ox-LDL+control AD组,ox-LDL+PON2 siRNA组JNK的磷酸化水平明显升高[(0.620±0.060)vs(0.3689±0.024),P0.05],表明PON2可抑制ox-LDL诱导的JNK信号通路的激活。结论:1.PON2可减少ox-LDL诱导的心肌细胞凋亡,减轻心肌细胞损伤。2.PON2可通过抑制氧化应激通路减轻ox-LDL对心肌细胞的损伤。3.PON2可通过抑制JNK信号通路减轻ox-LDL对心肌细胞的损伤。
【图文】：

图 1 在荧光显微镜下 PON2 siRNA 腺病毒的转染率he transfection rate of PON2 siRNAadenovirus under fmicroscope

图 2 心肌细胞中 PON2 表达的变 2 The changes of PON2 expression in c** P<0.05,vs controlAD group
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R54

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

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本文编号：2711081