刺芒柄花素对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响及作用机制的探讨

发布时间：2020-06-20 04:30

【摘要】：背景:绝经后女性心血管疾病高发现象备受关注。由于女性绝经后性激素结合球蛋白水平下降而引起血管内皮细胞功能障碍,进而启动了心血管疾病的发展过程。因此,防止内皮细胞功能障碍和促进血管新生是预防心血管疾病的关键。研究表明,刺芒柄花素是一种植物雌激素,具有拟雌激素作用与心血管保护作用密切相关。目的:探究刺芒柄花素在人脐静脉内皮细胞Human Umbilical Vein Endothelial Cells(HUVECs)中的药物作用,寻找药物浓度范围并证实刺芒柄花素促进HUVECs的增长。探讨刺芒柄花素对HUVECs增殖、早期凋亡及迁移表达水平的影响;探讨刺芒柄花素对HUVECs中IGF-1R和ICAM-1蛋白表达水平的影响。证实刺芒柄花素对心血管的保护作用,为刺芒柄花素成为治疗心血管疾病的新药提供理论依据。方法:采用MTT实验检测刺芒柄花素对HUVECs的增殖作用,设置不同药物浓度,检测药物作用48h后OD值,选出合适的促增殖浓度;采用流式细胞术检测刺芒柄花素对HUVECs的凋亡作用;采用划痕实验检测刺芒柄花素对HUVECs的迁移作用;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测刺芒柄花素作用HUVECs后蛋白因子IGF-1R和ICAM-1的表达情况。结果:MTT实验结果显示在0-10μmol/L浓度范围内随着刺芒柄花素浓度的增加OD值逐渐增大;流式细胞术结果显示随着刺芒柄花素浓度增加Q4象限早凋率逐渐下降;划痕实验结果显示随着刺芒柄花素浓度增大和作用时间延长划痕愈合率逐渐增大;Western Blot实验表明刺芒柄花素促使HUVECs中IGF-1R和ICAM-1蛋白因子的表达量增高。结论:刺芒柄花素通过调节HUVECs内IGF-1R和ICAM-1蛋白表达水平的增高,抑制HUVECs的早期凋亡,促进HUVECs的增殖和迁移,从而发挥对内皮细胞和血管的保护作用。可作为未来心血管疾病的预防和治疗用药提供新思路及新作用靶点。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R54
【图文】：

增殖作用,酚红,雌激素

2 结果2.1 刺芒柄花素促进 HUVECs 增殖去雌激素环境培养 HUVECs（实验前 4 天用无酚红的 1640 培养基进行培养，目的排除酚红的拟雌激素作用，模拟去雌激素环境），通过 MTT 实验检测刺芒柄花素在 0、0.5、1、2、5、8 和 10μmol/L 不同浓度下 HUVECs的增殖情况，作用 48h 后检测 OD 值。结果如图 1 所示：随着横轴刺芒柄花素浓度的增大，纵轴增殖率逐渐增强。说明刺芒柄花素在 0-10μmol/L 范围内有效促进 HUVECs 的增殖。

早期凋亡,酚红,雌激素,芒柄花素

2.2 刺芒柄花素抑制 HUVECs 早期凋亡去雌激素环境培养 HUVECs（实验前 4 天用无酚红的 1640 培养培养，目的排除酚红的拟雌激素作用，模拟去雌激素环境），内皮期凋亡增多，与临床上绝经后妇女内皮细胞变化情况相同。通过流术检测刺芒柄花素在 0、5 和 10μmol/L 不同浓度作用下 HUVECs 的亡情况，作用 48h 后检测其早期凋亡率。结果如图 2 中的 Q4 所示：芒柄花素浓度的增大，早期凋亡作用逐渐下降。说明刺芒柄0-10μmol/L 范围内有拟雌激素作用抑制 HUVECs 的凋亡作用。

【参考文献】