Rac1的亚型Rac1b在AngⅡ诱导的心房纤维化中的作用

发布时间：2020-06-27 10:56

【摘要】：目的:本研究拟建立Rac1b基因敲除的大鼠模型(以Rac1b~(-/-)表示),探讨Rac1b表达缺失对AngⅡ诱导的心房纤维化发生的影响,为房颤的临床治疗提供新思路。方法:此研究分成在体的体内部分和离体的体外部分一、体外部分体外分离培养原代野生型(Rac1b~(+/+))和纯合子(Rac1b~(-/-))SD乳鼠心肌成纤维细胞,进一步用AngⅡ干预成纤维细胞。通过流式细胞术评价AngⅡ对心肌成纤维细胞凋亡的影响及Rac1b基因无表达对心肌成纤维细胞凋亡的影响。二、体内部分将AngⅡ泵埋植于8周龄雄性Rac1b~(+/+)和Rac1b~(-/-)SD大鼠背部皮下,从而构建AngⅡ诱导的大鼠心房纤维化模型,并设立相应的对照组。应用半定量RT-PCR方法评价各组大鼠左心房组织中Rac1b基因的表达,应用免疫印迹技术评价大鼠左心房中Rac1b及ⅡI型胶原纤维、TGF-β1蛋白的表达,大鼠左心房组织Masson染色评价左心房组织的胶原纤维含量,超声心动图检查评价大鼠左心房内径大小变化。结果:1)Rac1b~(+/+)AngⅡ组(3.83±0.17)大鼠左心房内径大于Rac1b~(+/+)对照组和Rac1b~(-/-)AngⅡ组(均P0.05),Rac1b~(+/+)对照组(3.03±0.24)和Rac1b~(-/-)AngⅡ组(3.05±0.24)两组之间大鼠左心房内径并无差异(P0.05)。2)Rac1b~(+/+)AngⅡ组大鼠左心房的胶原纤维含量(38.03±7.17)显著高于Rac1b~(+/+)对照组和Rac1b~(-/-)AngⅡ组(均p0.01),而Rac1b~(-/-)AngⅡ组胶原含量(26.91±7.07)高于Rac1b~(+/+)对照组(15.61±3.46)(p0.05)。3)Rac1b~(+/+)AngⅡ组(0.55±0.09)Rac1b基因表达水平显著高于Rac1b~(+/+)对照组(0.31±0.08)。4)Rac1b~(+/+)AngⅡ组表达显著高于对照组和Rac1b~(-/-)AngⅡ组(均P0.01)。Rac1b~(-/-)AngⅡ组高于对照组表达(P0.05)。同时Rac1b~(+/+)AngⅡ组表达显著高于对照组和Rac1b~(-/-)AngⅡ组(均P0.05)。Rac1b~(-/-)AngⅡ组高于对照组表达(P0.05)。Rac1b~(+/+)AngⅡ组中Rac1b蛋白的表达显著高于Rac1b~(+/+)对照组(P0.01)。5)Rac1b~(+/+)对照组和Rac1b~(-/-)对照组两组成纤维细胞凋亡比率无显著性差(P0.05)。与对照组相比,Rac1b~(+/+)AngⅡ组成纤维细胞的凋亡比率显著增加P0.01)。Rac1b~(-/-)AngⅡ组成纤维细胞的凋亡率高于Rac1b~(+/+)AngⅡ组(P0.01)。结论:Rac1b有可能作为AngⅡ的下游效应因子参与AngⅡ诱导的心房纤维化的分子机制中。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.75
【图文】：

左心房,大鼠,纯合子

像、拍照并分析3.Western blot 检测取 Rac1b-/-和 Rac1b+/+SD 大鼠的左心房组织，放入研磨中后置于组织匀浆机器中，将组织磨碎。向管中加适量的 RIPA 蛋白裂解液，上裂解 30min，离心后取总蛋白上清液。而后经蛋白定量、变性后进行凝胶电、电转膜，5％脱脂奶粉中封闭，抗体孵育，经 ECL 发光液曝光后成像，检测c1b 蛋白的表达。以 GAPDH 作为内参成立的情况下，SD 大鼠左心房表达 Rac1白，Rac1b 敲除大鼠不表达 Rac1b 蛋白。1.3 Rac1b 基因敲除纯合子大鼠外观表型观察对纯合子大鼠与同窝野生型大鼠头部、尾部、四肢、躯干等进行体表外观的查，观察到纯合子大鼠正常存活，无身体畸形发生。acRacR

对照组,大鼠,统计比较,组图

图 4 Rac1b+/+对照组图 5 Rac1b+/+AngⅡ组图 6 Rac1b-/-AngⅡ组图 7 大鼠左心房内径统计比较 Rac1b+/+对照组、Rac1b+/+AngⅡ组、Rac1b-/-AngⅡ组三组大鼠 M 型超动图测量出的左心房内径大小，可以发现：Rac1b+/+AngⅡ组（3.83 0.17 ）左心房内径大于对照组和 Rac1b-/-AngⅡ组（均 P<0.05）, Rac1b+/+对照组（3Rac1b+/+对照组 Rac1b+Rac1b-/-AngIICA(Lm)

【参考文献】