RhoE内源性心肌保护作用的机制研究

发布时间：2020-06-28 04:40

【摘要】：第1章引言我们假设RhoE可通过调控NF-κB信号,在心肌梗死中发挥心肌保护作用。本研究以RhoE为基点,建立RhoE单倍不足和过表达小鼠,在明确基因工程小鼠构建成功的基础上,建立小鼠在体MI模型,从炎症、梗死面积、心功能和生存率等角度观察不同表达量RhoE对MI后小鼠心脏的影响;之后通过在体MI模型和成年小鼠心肌细胞分离和培养实验,观察RhoE与NF-κB信号的相互影响;通过以上实验阐明RhoE与NF-κB信号串扰在MI中的保护作用机制,为CVD的治疗提供科学依据和理论支持。第2章RhoE缺陷对心肌梗死的影响目的:探讨RhoE缺陷对小鼠MI后炎症、梗死面积、心功能和生存率的影响。方法:构建RhoE单倍不足小鼠,建立小鼠在体MI模型,于术后第3天使用Western blotting检测心脏中RhoE蛋白水平、炎症细胞标志物,qRT-PCR检测炎症因子水平,TTC染色检测心肌梗死面积大小,超声检测心脏EF值;观察MI术后1周内小鼠生存率。结果:RhoE缺陷小鼠心脏中RhoE蛋白表达量明显降低,RhoE缺陷促使MI后心肌中F4/80、Ly-6G表达量明显升高,心肌中IL-1β、TNF-α、MMP2和MMP9基因mRNA水平明升高,心肌梗死面积扩大,心脏EF值降低,MI后1周小鼠生存率更低。小结:RhoE缺陷可加剧MI后心肌炎症,扩大梗死面积,降低心功能和短期生存率。第3章RhoE过表达对心肌梗死的保护作用目的:探讨RhoE过表达对小鼠MI后炎症、梗死面积、心功能和生存率的影响。方法:构建心脏特异性RhoE转基因小鼠,建立小鼠在体MI模型,于术后第3天使用Western blotting检测心脏中RhoE蛋白水平、炎症细胞标志物,qRT-PCR检测炎症因子水平,TTC染色检测心肌梗死面积大小,超声检测心脏EF值;观察MI术后1周内小鼠生存率。结果:RhoE转基因小鼠心脏中RhoE蛋白表达量明显升高,RhoE过表达使MI后心肌中F4/80、Ly-6G表达量明显降低,心肌中IL-1β、TNF-α、MMP2和MMP9基因mRNA水平明降低,心肌梗死面积缩小,心脏EF值升高,MI后1周小鼠生存率与WT组相近。小结:RhoE具有内源性心肌保护作用,RhoE过表达可减轻MI后心肌损伤、减轻炎症,缩小梗死面积,保护心功能,并提高MI后小鼠的短期生存率。第4章心肌梗死中,RhoE负调控NF-κB活化发挥心肌保护作用目的:体内外实验探讨RhoE对NF-κB信号活化的影响。方法:在RhoE缺陷和过表达小鼠体内建立MI模型,于术后第3天,Western blotting检测细胞核p65和p50表达量;从RhoE缺陷和过表达小鼠心脏中分离心肌细胞,使用TNF-α刺激培养的心肌细胞,Western blotting检测细胞核p65和p50表达量。结果:RhoE缺陷小鼠MI模型中,细胞核p65和p50表达量显著升高,而RhoE过表达后,细胞核p65和p50表达量明显降低;在有/无TNF-α刺激的心肌细胞中,RhoE缺陷均促进了细胞核p65和p50表达量的显著升高,而RhoE过表达后显著降低了核p65和p50表达量。小结:RhoE可直接抑制NF-κB信号中p50和p65蛋白核转位,负调控NF-κB信号活化,对抗炎症,发挥心肌保护作用。第5章结论结论:RhoE在心肌梗死损伤中具有内源性心肌保护作用,可提高MI后小鼠的生存率;RhoE可能直接负调控NF-κB信号活化,减少NF-κB蛋白核转位,抑制炎症,缩小梗死面积,增强心功能,减轻MI损伤。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R542.22

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本文编号：2732569