sortilin通过ABCA1影响荷脂巨噬细胞胆固醇流出及主动脉粥样硬化病变

发布时间：2020-07-17 17:23

【摘要】：背景:分拣受体sortilin是由SORT1基因编码,属于囊泡分拣因子10(vacuolar protein sorting,Vps10p)结构域受体家族的一种分拣蛋白,能够特异性结合并转运胞内蛋白底物,形成胞内体到达胞膜或介导蛋白底物进入溶酶体降解,参与包括脂质相关蛋白在内多种靶蛋白的表达水平与功能。研究表明,sortilin参与调控细胞内脂质和体内血脂代谢过程,并且与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的形成密切相关。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)是一种关键的膜转运蛋白,介导巨噬细胞胆固醇从细胞内流出,具有抗AS作用。鉴于ABCA1在体内脂质代谢中的重要作用,探讨sortilin是否调控ABCA1蛋白水平则显得十分必要。本研究选取THP-1源性巨噬细胞和LDLR~(-/-)小鼠作为研究对象,旨在探讨soritlin对ABCA1表达、泡沫细胞形成以及AS的影响。方法:ox-LDL孵育THP-1源性巨噬细胞,采用qRT-PCR和Western blot方法检测不同浓度ox-LDL(0μg/mL,12.5μg/mL,25μg/mL,50μg/mL,100μg/mL)处理细胞24h后及ox-LDL处理不同时间(0h,6h,12h,24h,48h)后巨噬细胞内sortilin mRNA和蛋白水平;高表达和沉默THP-1巨噬细胞sortilin后;液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出情况,免疫共沉淀方法检测sortilin与ABCA1结合情况;高效液相色谱法检测细胞内脂质含量变化;油红O染色观察胞内脂滴形成情况。动物实验中,通过体视显微镜,苏丹IV、HE染色、Masson三色染色、油红O染色探讨LDLR~(-/-)小鼠动脉斑块病变情况。结果:THP-1巨噬细胞sortilin表达呈ox-LDL剂量和时间依赖性增加;并在50μg/mL ox-LDL处理24h后,THP-1巨噬细胞sortilin表达最显著;sortilin过表达后巨噬细胞胆固醇流出减少,并下调细胞内ABCA1蛋白水平,但对其mRNA水平无显著影响;免疫共沉淀检测结果发现sortilin能与ABCA1结合;进一步研究发现sortilin过表达后增加THP-1巨噬细胞内脂质蓄积。并且与LV-sortilin组相比,加入溶酶体抑制剂氯喹处理后,巨噬细胞ABCA1蛋白水平明显上调,而加入蛋白酶体抑制剂MG132后,巨噬细胞细胞ABCA1蛋白水平无明显改变。相反,使用shRNA沉默sortilin表达后,ABCA1的蛋白水平及其介导的胆固醇流出量明显增加。动物实验结果表明:转染LV-sortilin的小鼠主动脉脂质沉积和斑块面积增加,并且斑块内ABCA1表达减少,而且在转染LV-sortilin的基础上加入LV-ABCA1或溶酶体抑制剂氯喹可逆转这一情况。结论:sortilin能够抑制ABCA1蛋白表达和胆固醇流出,促进巨噬细胞泡沫化和AS的进展。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.5
【图文】：

巨噬细胞,蛋白表达,空白

50 μg/ml，100 μg/ml）ox-LDL 处理 THP-1 和 Western blot 测定细胞内 sortilin mRNA 和蛋噬细胞 sortilin 表达的影响。结果显示，与空白lin mRNA 和蛋白表达均高于空白组，并且 oxrtilin mRNA 和蛋白的表达显著增加，并且在 5胞时，sortilin mRNA 和蛋白水平达到高峰（图巨噬细胞不同时间梯度（0h，6h，12h，24h，HP-1巨噬细胞sortilin mRNA 和蛋白表达的影依赖性方式使 sortilin mRNA 和蛋白的表达显1 巨噬细胞 24h 时，sortilin mRNA 和蛋白表达 ox-LDL 以浓度依赖和时间依赖方式上调巨，并且在 50μg/ml ox-LDL 处理 THP-1 巨噬细胞最高。

巨噬细胞,蛋白表达

同浓度的ox-LDL处理巨噬细胞 24h后sortilin蛋白表达的变化。（*P<0.μg/ml ox-LDL 处理巨噬细胞不同时间后 sortilin mRNA 表达的变化。（p）

巨噬细胞,硕士学位论文,南华,蛋白表达

0μg/mlox-LDL处理巨噬细胞不同时间后sortilinmRNA表达的变化

【参考文献】