丹参酮ⅡA磺酸钠抑制低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的体外研究

发布时间：2020-07-24 04:37

【摘要】：目的肺动脉高压是慢性肺部疾病常见并发症。肺动脉平滑肌细胞异常增殖引起的肺血管重塑在肺动脉高压的形成机制中起着关键作用。虽然治疗潜在的肺部疾病可以降低轻度的肺动脉压力升高,但终末期肺病的肺动脉高压仍难以逆转。目前特发性肺动脉高压和慢性肺病所致肺动脉高压的治疗药物在临床试验中并未取得理想的效果。有研究表明中药丹参的有效成分-丹参酮ⅡA用于治疗肺动脉高压可以降低平均肺动脉压力,缓解临床症状、增加运动耐量,但具体机制不明。本研究通过观察丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS)干预对低氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖的影响并进一步探讨其分子机制。方法(1)大鼠肺动脉平滑肌细胞株传代后随机分为常氧组、常氧+STS组(5ng/ml、10ng/ml、20 ng/ml)、低氧组、低氧+STS组(5 ng/ml、10ng/ml、20 ng/ml)。用CCK-8分别测定各组的吸光度值代表肺动脉平滑肌细胞的增殖率。(2)同上述培养方法,将肺动脉平滑肌细胞随机分为常氧组、低氧组和低氧+STS组(10ng/ml),通过荧光定量PCR法分别测定各组细胞mTOR、eIF2α、c-myc mRNA的相对表达量。(3)培养方法与上述一致,常氧和低氧下将肺动脉平滑肌细胞随机分组培养,设常氧组、低氧组、低氧+STS组(10 ng/ml)、低氧+雷帕霉素组(20 nmol/L),采用蛋白质印迹法检测各组细胞mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-eIF2α、c-myc蛋白表达量。结果(1)与常氧组比较,低氧组细胞的增殖率明显升高,差异有统计学意义(P㩳0.05);与低氧组比较,STS干预后的低氧组细胞增殖率明显降低,差异有统计学意义(P㩳0.05)。然而,与常氧组比较,常氧+STS组细胞增殖率无明显差别,差异无统计学意义(P0.05)。(2)通过PCR检测分析显示:与常氧组比较,低氧组细胞mTOR、eIF2α和c-myc mRNA的相对表达量明显升高,差异有统计学意义(P均㩳0.05);与低氧组比较,低氧+STS组的三种mRNA相对表达量下降,其差异有统计学意义(P均㩳0.05)。(3)Western blotting法检测各组细胞蛋白表达:与常氧组比较,低氧组细胞mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-e IF2α、c-myc蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P均㩳0.05);低氧+STS组和低氧+雷帕霉素组mTOR、mTOR、t-eIF2α、p-eIF2α、c-myc蛋白表达较低氧组均升高,差异有统计学意义(P均㩳0.05);而低氧+雷帕霉素组与低氧+STS组的蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论(1)低氧可以上调mTOR、eIF2a、c-myc蛋白而促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,从而诱发肺动脉高压。(2)丹参酮ⅡA磺酸钠可以经mTOR信号通路,减少eIF2a及c-myc蛋白表达水平,抑制低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,对肺动脉高压有潜在的治疗作用。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R544.1
【图文】：

低氧,常氧,平滑肌细胞,平滑肌

3.1 肺动脉平滑肌细胞增殖情况的比较在未给予 STS 干预处理的情况下，与常氧组比较，低氧条件下平滑肌细的增殖水平呈现出显著升高的趋势（P㩳0.05），说明低氧可促进大鼠肺动脉肌细胞增殖。而给予 STS 干预处理常氧和低氧下培养的平滑肌细胞后的增殖况：与低氧组比较，低氧下的平滑肌细胞经 STS（5 ng/ml、10 ng/ml、20 n干预处理 60 小时后的增殖水平呈现下降趋势（P㩳0.05），说明 STS 对低氧平滑肌细胞增殖有抑制作用，而且随着 STS 浓度增加，抑制增殖的作用逐渐强，呈浓度依赖性。与常氧组比较，常氧下的平滑肌细胞经 STS（5 ng/ml、10 n干预 60 小时后的增殖水平（P㧐0.05）无明显下降，但 STS 浓度达到 20 ng细胞增殖水平呈现明显减少趋势，考虑此浓度的 STS 对细胞有毒性作用，因接下来均选择药物浓度为 10 ng/ml 的 STS 用于实验。（见图 3.1）

平滑肌细胞,低氧,肺动脉平滑肌细胞

丹参酮ⅡA 磺酸钠对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用及其机制研究胞加入 STS（10ng/mL）。采用实时荧光定量 PCR 检测 mTOR、eIF2α、c-myc mRNA的相对表达量，其结果显示：与常氧组比较，mTOR、 eIF2α 和 c-myc mRNA 在低氧培养的肺动脉平滑肌细胞的相对表达量明显升高（P㩳0.05），表明低氧能够促进平滑肌细胞高表达三种基因的 mRNA；而与低氧组比较，STS 处理低氧培养的平滑肌细胞后 mTOR、eIF2α、c-myc mRNA 相对表达量呈现下降（P㩳0.05），表明 STS 能抑制低氧下平滑肌细胞的 mTOR、eIF2α、c-myc mRNA 高表达。（见图 3.2）

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