microRNA-200b下调DNMT3A的表达对SD大鼠心肌纤维化抑制作用的研究

发布时间：2020-08-06 21:16

【摘要】：目的房颤(Atrial fibrillation,AF)是较为普遍的、慢性且持续性的一类心律失常,具有高发性和高危性两大特征,而且从治疗和预后来看,房颤目前的治疗仍有一定复发率,由房颤引起的脑卒中死亡率高达25%。研究表明心房颤动的发生发展机制主要包括电重构和机械重构两方面,电重构一般表现为离子通道的改变,而结构重构的突出表现为心肌纤维化。DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶的催化作用下将甲基转移到特定碱基上的过程,由此可造成生物体发生诸如胚胎分化、基因失活,器官衰老等现象。目前有越来越多的文献研究证明作为DNA甲基转移酶重要成员之一的DNMT3A对心肌纤维化中心肌成纤维细胞发生发展的水平有重要的影响。micro RNAs(mi RNAs or mi Rs)是一类小片段非编码RNA,在转录水平调节靶基因的表达。先前的研究显示mi R-200b可以通过调节相应的靶基因参与细胞增殖、凋亡、癌变、纤维化等病理生理过程。已有文献研究指出mi R-200b可调控的DNMT3A表达影响非小细胞肺癌的发生发展。但DNMT3A对心肌纤维化发生发展的影响是否也受到mi R-200b的调控目前还不清楚。因此本研究通过观察心肌成纤维细胞中mi R-200b及其潜在的靶基因DNMT3A在心肌纤维化过程中的表达情况,及其调控关系在心肌纤维化过程中的作用,为探寻心肌纤维化提供理论依据。方法体内实验:将60只8周龄雄性SD大鼠随机分为模型组及对照组。模型组的大鼠予以诱导剂ISO 1次/d[5mg/(kg.d)]皮下注射,对照组给予等剂量的生理盐水,持续7d。造模成功后处死动物取出心脏标本,HE染色法和Masson染色法观测各组心脏标本中的心肌纤维化程度及胶原容积分数(CVF);采用免疫组化法检测各组大鼠心肌组织Col1A1、α-SMA和DNMT3A表达;q RT-PCR检测mi R-200b的表达;Western blot法测定α-SMA、Col1A1、DNMT3A的表达。体外实验:培养SD乳大鼠心肌成纤维细胞。将mi R-200b促进剂(mimics)、抑制剂(inhibitors)分别转染于CFs中,并设立阴性及空白对照组。采用q RT-PCR检测mi R-200b、DNMT3A、Col1A1和α-SMA的RNA水平的表达;采用Western blot检测转染不同试剂后的CFs中DNMT3A、Col1A1和α-SMA蛋白表达;采用MTT法观察分别转染后CFs的增殖情况。结果体内实验:两组对比,HE染色和Masson染色结果显示实验组SD大鼠标本间质中出现明显的胶原纤维增生,实验组心肌间质CVF发生明显的增加改变。免疫组化结果显示与对照组比较,模型组Col1A1、α-SMA和DNMT3A的蛋白表达含量明显升高。q RT-PCR结果显示相较于正常组,模型组心脏标本提取的总RNA中mi RNA-200b表达水平明显下降。Western blot检测表明模型组α-SMA、Col1A1、DNMT3A的含量水平明显高于对照组。体外实验:q RT-PCR结果显示,α-SMA、Col1A1、DNMT3A在mi R-200b促进剂组的CFs中表达均明显低于正常组及阴性对照组,而在mi R-200b抑制剂组的CFs中则反之。Western blot结果显示,促进剂组中DNMT3A、Col1A1、α-SMA蛋白表达降低,而在抑制剂组表达上升。MTT结果表明mi R-200b可抑制CFs生长。结论综上所述,mi R-200b可能是通过抑制DNMT3A,对CFs甲基化产生影响,控制CFs的活化,降低心肌纤维化水平。而DNMT3A可能是心肌纤维化的表观遗传学治疗靶点之一,同时也为预防和研究心肌纤维化产生提供新的思路。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R541.75
【图文】：

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